Influência do estrógeno na regulação da autofagia e apoptose dos osteócitos no processo alveolar de ratas ovariectomizadas

• Autor(a) principal: Florencio-Silva, Rinaldo [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3139563; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46776
• topic: Ratas; Estrógenos; Osteócitos; Autofagia; Apoptose ratas; Processo alveolar; Ovariectomia; Estrogens; Osteocytes; Autophagy; Apoptosis

A autofagia é um processo que reduz o estresse celular, aumentando a sobrevivência das células. O estrógeno é um hormônio que inibe a reabsorção óssea e a apoptose de osteócitos, promovendo a homeostase óssea. Porém, ainda não está claro se o estrógeno interfere no processo de autofagia para garantir a sobrevivência dos osteócitos. Objetivos: Avaliar a influência do estrógeno na incidência de autofagia e de apoptose nos osteócitos do processo alveolar de ratas ovariectomizadas. Material e métodos: Sessenta e seis ratas adultas foram SHAM-operadas (SHAM) ou ovariectomizadas (OVX) e tratadas com estrógeno (Grupo OVXE) ou receberam solução veículo (Grupos SHAM e OVX), por 15, 30 e 45 dias. Seis ratas SHAM e seis OVX foram eutanasiadas antes dos tratamentos para obtenção dos grupos basais (SHAMBL e OVXBL). Após os tratamentos e eutanásia, as maxilas contendo o primeiro molar foram processadas para inclusão em parafina e Araldite. Cortes corados com HE foram submetidos à histomorfometria para obtenção da área óssea interradicular, número de osteócitos e de lacunas vazias; outros foram submetidos aos métodos da prata para análise dos prolongamentos dos osteócitos e do TRAP para quantificação de osteoclastos. Cortes foram submetidos ao método do TUNEL e à imuno-histoquímica para análise de apoptose (caspase-3 clivada, BAX, Bcl2 e HMGB1) e autofagia (beclina-1, LC3II, p62, ou imunofluorescência para LC3II e p62), além da análise ultraestrutural. Cortes também foram submetidos aos métodos do TUNEL/TRAP combinados e cortes semifinos foram submetidos ao método de Sudan Black para detecção de lipídeo. Resultados: O grupo OVXBL mostrou maior porcentagem de osteócitos caspase-3, TUNEL e p62-positivos, menor porcentagem de osteócitos beclina-1 e LC3II-positivos, e maior número de lacunas vazias e de osteoclastos, em comparação ao grupo SHAMBL. O grupo tratado com estrógeno por 15 dias apresentou menor porcentagem de osteócitos caspase-3 e TUNEL-positivos, e maior porcentagem de osteócitos LC3II-positivos, em comparação ao grupo OVX. O grupo tratado por 30 dias mostrou menor número de lacunas vazias e de osteócitos TUNEL e p62-positivos em comparação ao OVX. O grupo tratado por 45 dias evidenciou maior área óssea e número de osteócitos, menor porcentagem de osteócitos caspase-3, BAX, TUNEL e p62-positivos, assim como maior porcentagem de osteócitos beclina-1 e LC3II-positivos, quando comparado ao grupo OVX. O tratamento com estrógeno por 15 e 30 dias promoveu diminuição significante no número de osteoclastos, em comparação aos grupos OVX. Notou-se maior porcentagem de osteócitos com citoplasma positivo ao HMGB1 e menor porcentagem de osteócitos com núcleo HMGB1- positivo nos grupos OVX. Gotículas de lipídios foram observadas com maior frequência nos osteócitos dos grupos OVX. A análise ultraestrutural evidenciou osteócitos com gotículas lipídicas ocupando amplas regiões citoplasmáticas, principalmente nos grupos OVX, e osteócitos com características ultraestruturais de apoptose. Conclusões: Nossos resultados indicam que a deficiência estrogênica diminui a autofagia e aumenta a apoptose dos osteócitos, enquanto o tratamento com estrógeno mantém a viabilidade dos osteócitos aumentando a autofagia e inibindo a apoptose, sugerindo uma associação inversamente proporcional entre esses dois processos nessas células. Esta associação inversamente proporcional entre autofagia e apoptose reforça a ideia de que o estrógeno deve participar no processo de controle da autofagia, além de reduzir a apoptose em osteócitos.