Efeito do infliximabe e da diacereína na via eruptiva de molares de ratos.

• Autor(a) principal: Pizzol Junior, Jose Paulo De [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=8754029; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59758
• topic: Erupção Dentária; TNF-α 3; IL-1 4; Metaloproteinase Da Matriz; Tooth Eruption; TNF-α 3; IL-1 4; Matrix Metalloproteinase

Durante a erupção dentária uma cascata complexa de eventos celulares e moleculares ocorre para promover a degradação da lâmina própria e osso situados entre o germe dentário e a mucosa oral. O fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e a interleucina-1 (IL-1) são citocinas envolvidas com a osteoclastogênese e a ativação de metaloproteinases da matriz (MMPs). O propósito deste estudo foi avaliar se o infliximabe (bloqueador do TNF-α) e a diacereína (inibidor da síntese de IL-1) interferem no processo eruptivo, e em mediadores da osteoclastogênese e/ou do processo de degradação da via eruptiva durante a erupção de molares de ratos. Foram utilizados 108 ratos com 6 e 12 dias distribuídos em 4 grupos (n=27 ratos por grupo): GC (grupo controle) – soro fisiológico; GDIA –100 mg/kg/dia de diacereína (anti-IL-1 – Artrodar® - TRB Pharma Indústria Química e Farmacêutica Ltda); GINF –5mg/kg/dia de infliximabe (anti-TNF-α – Remicade® - Janssen Biotec.); GINF+DIA –5mg/kg/dia de infliximabe + 100 mg/kg/dia de diacereína. Ratos com 6 dias receberam os tratamentos durante 3 e 5 dias; ratos com 12 dias foram tratados durante 4 dias. Após 24 horas da última injeção, os ratos foram sacrificados. Fragmentos da mucosa oral foram congelados para detecção do TNF-α e IL-1β por western blot. Fragmentos de maxilas contendo o 1º molar foram fixadas, descalcificadas e incluídas em parafina para microscopia de luz. Cortes contendo a via eruptiva do 1º molar foram corados com HE para análise morfológica. Alguns cortes foram submetidos as reações imuno-histoquímicas para TNF-α, IL-1, IL-6, ligante do receptor ativador do fator nuclear kappa B (RANKL), osteoprotegerina (OPG), MMP-1 e MMP-9. O número de células imunomarcadas para IL-1, IL-6, MMP-1 e MMP-9 na lâmina própria foi computado enquanto que o número de células positivas ao RANKL e à OPG foi obtido na superfície óssea. Alguns cortes foram submetidos à reação histoquímica para fosfatase ácida tartarato-resistente (TRAP), e o número de osteoclastos TRAP-positivos na superfície óssea foi computado. Cortes corados com picrosirius-red foram usados para estimar o conteúdo de colágeno birrefringente na lâmina própria. Os dados foram analisados usando Two-way ANOVA com o teste de Tukey (p≤0,05). Fragmentos de maxila (n=3/grupo) foram fixadas em formaldeído/glutaraldeído, descalcificadas e processadas para análise ao microscópio eletrônico de transmissão. Os primeiros molares superiores dos animais com 9 e 11 dias apresentaram-se na fase eruptiva intraóssea e aos 16 dias na fase de penetração na mucosa. Em todos os períodos, células imunopositivas ao TNF-α, IL-1β, IL-6, MMP-1 e MMP-9 foram observadas na lâmina própria da via eruptiva. Na via eruptiva dos animais do GC, um significante aumento na imunoexpressão de TNF-α foi observado com o decorrer da idade enquanto que o pico da imunoexpressão de IL-1β foi detectado aos 11 dias. Em relação aos grupos tratados, uma redução significante de TNF-α foi detectada na via eruptiva do grupo GINF+DIA nos ratos de 16 dias. A imunoexpressão de IL-1β foi significantemente menor nos grupos GDIA e GINF+DIA aos 11 dias, enquanto que, aos 16 dias, significante redução foi observada somente no GINF+DIA. De 9 para 11 dias, a superfície óssea mostrou um significante aumento no número de osteoclastos dos animais do GC enquanto que, nos grupos tratados, significantes diferenças não foram observadas. Aos 9 e 11 dias, significantes diferenças entre os grupos não foram detectadas no número de células imunopositivas ao RANKL e à OPG na superfície óssea. A análise ultraestrutural dos grupos tratados revelou osteoclastos exibindo cromatina condensada, típico de células em apoptose; borda em escova e zona clara não foram observadas nestes osteoclastos alterados. Aos 16 dias, o conteúdo de colágeno foi significantemente maior na lâmina própria dos ratos dos grupos GDIA e GINF em comparação ao GC (p=0,001 e p=0,003, respectivamente). Em todos os períodos, diferenças significantes entre os grupos não foram detectadas no número de células imunopositivas à MMP-1, MMP-9 e IL-6- na lâmina própria. No decorrer dos períodos, houve um aumento significante de MMP-1, MMP-9 e IL-6 em todos os grupos, com exceção da imunoexpressão de MMP-1 e IL-6 no GINF. Os nossos resultados mostraram que o pico de IL-1β ocorre na fase intraóssea enquanto que o pico de TNF-α ocorre na fase de penetração na mucosa. Embora o tratamento com diacereína e infliximabe causaram alterações na imunoexpressão de IL-1β e TNF-α na lâmina própria, estes não promoveram alterações significantes no processo eruptivo. A diacereína e o infliximabe não interferiram na osteoclastogênese na via eruptiva, no entanto, os nossos resultados sugerem que estes medicamentos devem promover a apoptose de osteoclastos.