High resolution melting versus sequenciamento genético de nova geração na detecção de mutação do gene KRAS em câncer colorretal

• Autor(a) principal: Miranda, Raelson Rodrigues [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5014406; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50800
• topic: Neoplasias colorretais; Análise mutacional de DNA; K-ras Gene; DNA melting; PCR em tempo real; Colorectal neoplasms; Mutational DNA analysis; K-ras gene; DNA melting; Real-time PCR

Introdução: As mutações do gene KRAS no câncer colorretal são da ordem de 34%, conferindo pior prognóstico. As mais frequentes estão nos éxons 2, 3 e 4 respectivamente. O conhecimento acerca do perfil mutacional de KRAS têm papel crucial no manejo dessa doença, uma vez que anticorpos monoclonais como cetuximabe e panitumumabe são indicados apenas em tumores KRAS selvagem. Em outras palavras, tem importante valor preditivo. PCR-High Resolution Melting é uma nova tecnologia capaz de detectar mutações com alta sensibilidade através de variações da temperatura de melting do DNA, com um custo menor em relação aos métodos de sequenciamento. Objetivo: avaliar a capacidade de detecção de mutação no gene KRAS por High Resolution Melting - HRM nos éxons 2, 3 e 4 e comparar com sequenciamento de nova geração. Métodos: Realizamos análise de HRM em 47 amostras de pacientes portadores de adenocarcinoma de cólon utilizando StepOne plus Real-time PCR e Illumina HiSeq como plataforma de referência para sequenciamento de nova geração. A análise estatística foi feita pelo software SPSS v20.1. Resultados: Em relação ao éxon 2, as curvas de melting foram diferentes entre os grupos selvagem e mutados. A média da temperatura de melting (Tm) foi de 78,13 ºC para o grupo selvagem e 77,87 ºC para o grupo mutado (p= 0.001; IC 95%: 0,11-0,41; Teste T). A sensibilidade foi de 93,8% e a especificidade de 96,6%, com valor preditivo positivo de 92,2%, valor preditivo negativo 98,5%, acurácia 91,5% e taxas de falso positivo e negativo de 3,4% para HRM. Em relação aos éxons 3 e 4, as curvas de melt entre mutados e selvagens não se diferenciaram. Conclusões: Neste estudo, a técnica de HRM mostrou ser uma boa alternativa de rastreio de mutações no éxon 2 de KRAS em câncer colorretal com alta sensibilidade e especificidade. Contudo, para os éxons 3 e 4, HRM não conseguiu diferenciar entre mutados e selvagens.