Caracterização molecular, avaliação do perfil de susceptibilidade a antifúngicos e formação de biofilme de isolados clínicos pertencentes ao complexo Candida haemulonii e Candida auris

• Autor(a) principal: Lima, Soraia Lopes [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5022200; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50775
• topic: Candida Spp; Candida haemulonii; Biologia molecular; Identificação molecular; Susceptibilidade; Biofilme; Candida Spp; Candida haemulonii; Molecular biology; Molecular identification; Susceptibility; Biofilm

As espécies do complexo Candida haemulonii (C. haemulonii, C. haemulonii var. vulnera e C. duobushaemulonii) e as filogeneticamente relacionadas (C. auris e C. pseudohaemulonii) são leveduras emergentes que têm sido identificadas como agentes causadores de micoses superficiais e invasivas, responsáveis por altas taxas de morbidade e mortalidade. Devido às limitações dos métodos fenotípicos em identificar espécies filogeneticamente próximas, como as do complexo C. haemulonii e relacionadas, é fundamental a utilização de técnicas moleculares, como o sequenciamento da região ITS do DNAr ribossomal, que é considerado padrão ouro para a identificação acurada destas espécies. Uma vez que estes micro-organismos são encontrados em ambientes hospitalares e tem apresentado baixa susceptibilidade aos antifúngicos, é fundamental que mais estudos sejam realizados para avaliação de suas características biológicas. Objetivos: (i) Identificar isolados clínicos armazenados no Banco de Micro-organismos do LEMI identificados como C. haemulonii (sensu lato) e C. auris por sequenciamento da região ITS do DNAr gerando sequências de alta qualidade; (ii) Avaliar o perfil de susceptibilidade in vitro destes isolados frente a 5 antifúngicos; (iii) Avaliar a capacidade formação de biofilme de isolados de C. haemulonii (sensu lato) e espécies relacionadas. Material e métodos: Foram selecionados 66 isolados clínicos, obtidos ao longo do período de 2008 a 2016, provenientes de diferentes centros médicos de quatro países da América Latina, oriundos de diferentes sítios de isolamento. Para a identificação molecular foi realizado PCR e sequenciamento da região ITS do DNAr e as sequências obtidas comparadas com aquelas depositadas no banco genômico NCBI. Os testes de susceptibilidade in vitro frente aos antifúngicos fluconazol (FLC), voriconazol (VRC), anidulafungina (ANI), 5-fluorocitosina (5-FC) e anfotericina-B (AMB) foram realizados de acordo com o documento CLSI M27-A3. Para os ensaios de biofilme foram utilizadas placas de 96 poços e a quantificação realizada a partir da coloração com cristal violeta. Resultados: Entre os 66 isolados estudados, 37 foram identificados como C. auris, 11 como C. haemulonii var. vulnera, 9 como C. haemulonii (sensu stricto) e 9 como C. duobushaemuonii. Nenhum isolado de C. pseudohaemulonii foi encontrado. Foram observadas variações inter-específicas nos padrões de susceptibilidade frente aos cinco antifúngicos testados. As 4 espécies identificadas mostraram-se resistentes à AMB e FLC. Quanto ao VRC, foram obtidos menores valores de CIMs para a maioria dos isolados de C. haemulonii (sensu lato). Os fármacos 5-FC e ANI exibiram atividade antifúngica contra os isolados testados. Em relação à capacidade de formação de biofilme, as espécies C. haemulonii (sensu stricto) e C. haemulonii var. vulnera apresentaram maior variabilidade intra-específica. C. auris foi a espécie alto formadora de biofilme e C. duobushaemulonii baixo formadora. Conclusões: O sequenciamento da região ITS do DNAr permitiu a identificação acurada dos isolados analisados e gerou sequências de alta qualidade. As espécies do complexo C. haemulonii e C. auris mostraram-se resistentesà AMB e FLC, sendo a grande maioria dos isolados susceptíveis à ANI e 5-FC. Todas as espécies estudadas foram capazes de formar biofilme, destacando-se os isolados de C. auris, como alto formadora de biofilme entre aqueles analisados neste estudo.