O papel da Ezrina e do receptor B2 adrenérgico (B2AR) na replicação viral em células T CD4+ infectadas pelo HIV-1
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2022 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNIFESP |
Texto Completo: | https://repositorio.unifesp.br/11600/66504 |
Resumo: | Durante as duas últimas décadas, muitos estudos tiveram como objetivo entender a interação entre o Sistema Nervoso Simpático e o Sistema Imunológico e como a desordem desta relação poderia impactar na patogênese ou curso de patologias. Pacientes com altos níveis de noradrenalina são considerados como piores controladores de viremia relacionada ao HIV-1 quando comparados a pacientes com níveis normais. Os β2ARs são expressos na superfície celular e interagem com proteínas locais, como proteínas de membrana, filamentos de Actina do córtex celular e a “proteína ligante 50 de Ezrina-Radixina-Moesina” (EBP50). Esta dissertação teve como objetivo investigar o envolvimento da Ezrina na replicação viral de células T CD4+ da linhagem Jurkat infectadas pelo HIV-1. Células T CD4+ da linhagem Jurkat foram cultivadas, silenciadas quanto à expressão pós transcricional de Ezrina por oligonucleotídeos anti-senso e infectadas por HIV-1. Em todos os experimentos realizados, sobrenadantes e pellets celulares foram coletados. Sobrenadantes para quantificar o RNA viral por RT-qPCR (carga viral) e pellets celulares para quantificar a expressão relativa de β2ARs por qPCR e para a verificação da expressão proteica de β2AR e Ezrina em extratos proteicos por Western Blot. A expressão proteica de Ezrina é significativamente reduzida em células T CD4+ da linhagem Jurkat em momentos iniciais da infecção pelo HIV-1. Células da linhagem Jurkat cuja expressão pós transcricional de Ezrina foi silenciada produzem um número elevado vRNA. O mesmo tipo celular apontado quando infectado e tratado com agonistas da via adrenérgica apresenta níveis reduzidos de carga viral. |
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Esta dissertação teve como objetivo investigar o envolvimento da Ezrina na replicação viral de células T CD4+ da linhagem Jurkat infectadas pelo HIV-1. Células T CD4+ da linhagem Jurkat foram cultivadas, silenciadas quanto à expressão pós transcricional de Ezrina por oligonucleotídeos anti-senso e infectadas por HIV-1. Em todos os experimentos realizados, sobrenadantes e pellets celulares foram coletados. Sobrenadantes para quantificar o RNA viral por RT-qPCR (carga viral) e pellets celulares para quantificar a expressão relativa de β2ARs por qPCR e para a verificação da expressão proteica de β2AR e Ezrina em extratos proteicos por Western Blot. A expressão proteica de Ezrina é significativamente reduzida em células T CD4+ da linhagem Jurkat em momentos iniciais da infecção pelo HIV-1. Células da linhagem Jurkat cuja expressão pós transcricional de Ezrina foi silenciada produzem um número elevado vRNA. O mesmo tipo celular apontado quando infectado e tratado com agonistas da via adrenérgica apresenta níveis reduzidos de carga viral.During the last two decades, many studies have aimed to understand the interaction between the Sympathetic Nervous System and the Immune System and how the disorder of this relationship could impact the pathogenesis or course of pathologies. Patients with high levels of noradrenaline are considered to be worse controllers of viremia related to HIV-1 when compared to patients with normal levels. β2ARs are expressed on the cell surface and interact with local proteins such as membrane proteins, cell cortex Actin filaments, and Ezrin-Radixin-Moesin binding protein 50 (EBP50). This dissertation aimed to investigate the involvement of Ezrina in the viral replication of TCD4+ cells of the Jurkat lineage infected by HIV-1. Jurkat TCD4+ cells were cultured, silenced for post-transcriptional Ezrin expression by antisense oligonucleotides, and infected by HIV-1. In all experiments performed supernatants and cell pellets were collected. Supernatants to quantify viral RNA by RT-qPCR (viral load) and cell pellets to quantify the relative expression of β2ARs by qPCR and to verify the protein expression of β2AR and Ezrin in protein extracts by Western Blot. Ezrina protein expression is significantly reduced in Jurkat lineage at the earliest times of HIV-1 infection. Jurkat cells that post-transcriptional Ezrina expression was silenced produce a high number of vRNA. The same cell type identified when infected and treated with adrenergic pathway agonists has low levels of viral load.70 f.porUniversidade Federal de São PauloHIV-1EzrinaReceptor β2 adrenérgicoCélulas T CD4+JurkatO papel da Ezrina e do receptor B2 adrenérgico (B2AR) na replicação viral em células T CD4+ infectadas pelo HIV-1The role of Ezrin and B2 adrenergic receptor (B2AR) in viral replication of infected CD4+ T cells by HIV-1info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNIFESPinstname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)instacron:UNIFESPEscola Paulista de Medicina (EPM)Microbiologia e ImunologiaVirologiaORIGINALDissertacaoTatianeMontes.pdfDissertacaoTatianeMontes.pdfDissertacaoapplication/pdf1414512${dspace.ui.url}/bitstream/11600/66504/1/DissertacaoTatianeMontes.pdf7a752b4483c87273ddf8ff6a77f7c692MD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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O papel da Ezrina e do receptor B2 adrenérgico (B2AR) na replicação viral em células T CD4+ infectadas pelo HIV-1 Andrade, Tatiane Montes de [UNIFESP] HIV-1 Ezrina Receptor β2 adrenérgico Células T CD4+ Jurkat |
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HIV-1 Ezrina Receptor β2 adrenérgico Células T CD4+ Jurkat |
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Durante as duas últimas décadas, muitos estudos tiveram como objetivo entender a interação entre o Sistema Nervoso Simpático e o Sistema Imunológico e como a desordem desta relação poderia impactar na patogênese ou curso de patologias. Pacientes com altos níveis de noradrenalina são considerados como piores controladores de viremia relacionada ao HIV-1 quando comparados a pacientes com níveis normais. Os β2ARs são expressos na superfície celular e interagem com proteínas locais, como proteínas de membrana, filamentos de Actina do córtex celular e a “proteína ligante 50 de Ezrina-Radixina-Moesina” (EBP50). Esta dissertação teve como objetivo investigar o envolvimento da Ezrina na replicação viral de células T CD4+ da linhagem Jurkat infectadas pelo HIV-1. Células T CD4+ da linhagem Jurkat foram cultivadas, silenciadas quanto à expressão pós transcricional de Ezrina por oligonucleotídeos anti-senso e infectadas por HIV-1. Em todos os experimentos realizados, sobrenadantes e pellets celulares foram coletados. Sobrenadantes para quantificar o RNA viral por RT-qPCR (carga viral) e pellets celulares para quantificar a expressão relativa de β2ARs por qPCR e para a verificação da expressão proteica de β2AR e Ezrina em extratos proteicos por Western Blot. A expressão proteica de Ezrina é significativamente reduzida em células T CD4+ da linhagem Jurkat em momentos iniciais da infecção pelo HIV-1. Células da linhagem Jurkat cuja expressão pós transcricional de Ezrina foi silenciada produzem um número elevado vRNA. O mesmo tipo celular apontado quando infectado e tratado com agonistas da via adrenérgica apresenta níveis reduzidos de carga viral. |
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2022 |
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