Caracterização de Aspergillus spp. no cenário clínico brasileiro, modelos experimentais de aspergilose invasiva e avaliação farmacológica dos novos compostos F901318 e APX001A

• Autor(a) principal: Negri, Clara Ezequiel [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5507633; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50664
• topic: Aspergillus Spp; Espécies crípticas; Resistência a triazólicos; Modelos experimentais de aspergilose invasiva; Avaliação de novos fármacos; Farmacorresistência fúngica; Modelos animais de doenças; Triazóis; Aspergillus Spp; Drug resistance, fungal; Triazoles; Modelos experimentais de aspergilose invasiva; Disease models, animal

Aspergillus é um gênero de fungos filamentosos frequentemente isolado em casos de infecções fúngicas invasivas em hospitais terciários no mundo. O gênero é constituído atualmente por cerca de 350 espécies, sendo mais de 40 já descritas como patógenos humanos, em diversas síndromes clínicas. A. fumigatus é, em geral, a espécie mais prevalente em casos de aspergilose invasiva (AI), no Brasil e no mundo. O cenário brasileiro em relação a espécies crípticas ou raras de Aspegillus que apresentem resistência intrínseca e em relação a isolados de A. fumigatus resistentes a triazólicos não é conhecido. Dada a emergência de resistência a antifúngicos reportada em diversos países, diversas interações medicamentosas com outros fármacos e toxicidade considerável a anfotericina B, novos fármacos, com novos alvos terapêuticos, são urgentemente requeridos. Da mesma forma, há interesse na padronização de modelos que possibilitem determinar parâmetros de farmacocinética (PK) e farmacodinâmica (PD) associados a maior eficiência no tratamento, utilizando diferentes regimes terapêuticos. Sendo assim, os artigos aqui apresentados visam caracterizar a distribuição de espécies e perfil de susceptibilidade de Aspergillus spp. no cenário clínico brasileiro, verificar a existência de resistência adquirida a triazólicos, bem como desenvolver modelos experimentais de AI aplicados a análise de resposta terapêutica e por fim, avaliar PD dos novos compostos F901318 e da forma ativa APX001A do pró-fármaco APX001 em diversos modelos experimentais de AI. Artigo científico 1: Este estudo teve como objetivo avaliar a distribuição de espécies crípticas e raras de Aspergillus spp e a susceptibilidade in vitro a triazólicos em 133 isolados clínicos provenientes de 12 centros médicos brasileiros. A identificação de espécies foi realizada aplicando abordagem polifásica, incluindo caracterização morfológica, sequenciamento da região ITS, genes calmodulina e β-tubulina e análises filogenéticas, quando necessário. Testes de susceptibilidade in vitro foram realizados de acordo com o documento CLSI M38-A2 (2008). Demonstramos alta prevalência de espécies crípticas (19%), e três isolados representantes das espécies A. thermomutatus, A. ochraceus and A. calidoustus que apresentaram susceptibilidade reduzida frente aos triazólicos. Artigo científico 2: Neste estudo avaliamos a susceptibilidade in vitro de 221 isolados clínicos de A. fumigatus provenientes de 6 centros médicos brasileiros, de acordo com o documento CLSI M38-A2 (2008). Identificou-se 61 (27%) com valores de CIMs iguais ao de cut-off epidemiológico (VCE) frente a itraconazol e/ou acima do VCE frente a qualquer triazólico testado. Nenhuma mutação no gene CYP51A, relacionada a resistência a triazólicos foi encontrada, demonstrado que o uso de triazólicos no tratamento de aspergilose no Brasil ainda parece ser seguro. Artigo científico 3: F901318 (F2G Ltd) é um novo fármaco em desenvolvimento pertencente a nova classe terapêutica dos orotomides. Novos modelos experimentais de infecção sinopulmonar causada por A. flavus in vitro (modelos estático e dinâmico) e in vivo (modelo murino) foram desenvolvidos para avaliar a PD de F901318, utilizando galactomanana (GM) como biomarcador de resposta terapêutica. Modelos matemáticos foram utilizados para correlacionar a exposiçãoresposta ao composto. Os novos modelos experimentais demonstraram eficácia na avaliação farmacológica de antifúngicos. F901318 demonstrou importante efeito antifúngico em todos os modelos, com resultados no mínimo equivalentes aos de antifúngicos comumente utilizados. Artigo científico 4: APX001A (Amplyx Ltd) é a forma ativa do novo pró-fármaco APX001, representante de nova classe antifúngica que atua na parede celular da célula fúngica. A PD de APX001A foi avaliada através de testes de susceptibilidade in vitro de acordo com EUCAST e também utilizando modelo estático in vitro de aspergilose pulmonar invasiva causada por isolado de A. fumigatus (isolados sensível e outros sabidamente resistentes a triazólicos), GM foi utilizada como biomarcador de resposta terapêutica. A concentração efetiva mínima (CEM) de 0,03 mg/L foi obtida para todos os isolados nos testes de susceptibilidade. Houve supressão quase máxima de GM no compartimento endotelial do modelo estático quando exposto a 0,5 mg/L de APX001A em todos os isolados testados. Foi demonstrada atividade do composto frente a A. fumigatus, incluindo isolados sabidamente resistentes a outras classes terapêuticas, evidenciando potencial uso de APX001A no tratamento de AI.