Papel da acetilação no ciclo de vida de Leishmania mexicana
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2021 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNIFESP |
Texto Completo: | https://repositorio.unifesp.br/xmlui/handle/11600/65084 |
Resumo: | Leishmania é o agente etiológico das leishmanioses, uma doença infecciosa grave. Durante o ciclo de vida, o parasito passa por diferentes ambientes, se adaptando aos mesmos por alterações na regulação da expressão gênica, transcrição, tradução e metabolismo. A regulação da expressão gênica em tripanosomatídeos ocorre principalmente de maneira pós-transcricional, através de mecanismos de estabilização dos mRNAs e da regulação da tradução. Análises de proteômica realizadas pelo nosso grupo revelaram um perfil de acetilação diferencial de proteínas entre os três estágios principais de Leishmania mexicana (procíclico, metacíclico e amastigota) sugerindo um papel central dessa modificação na diferenciação do parasito. A acetilação de lisina é regulada por duas enzimas, lisinas acetiltransferases (KATs), que adicionam grupos acetil nos resíduos de lisina, e lisinas desacetilases (KDACs), que removem estes grupos. As KDACs são divididas em duas classes: dependentes de NAD+ (sirtuínas) e de zinco (DACs). Neste trabalho, as proteínas NAT10 do grupo das KATs e DACs (1, 3, 4 e 5) do grupo das KDACs foram selecionadas com objetivo central de investigar a importância dessas proteínas na biologia de L. mexicana. Para isso, o sistema de edição gênica CRISPR-Cas9 foi utilizado para obtenção de linhagens hemi-nocautes, nocautes e fluorescentes “tagged”. Utilizando as linhagens fluorescentes “tagged” evidenciamos que DAC1 e DAC5 são citoplasmáticas, enquanto DAC3, DAC4 e NAT10 têm localização nuclear, em todas as formas do parasito. Curiosamente, DAC3 é encontrada em regiões de eucromatina, enquanto o DAC4 ocupa predominantemente as regiões de heterocromatina. Além disso, descobrimos que DAC1, DAC3 e NAT10 são essenciais para a sobrevivência das formas procíclicas de L. mexicana. As análises fenotípicas dos parasitos mutantes revelaram que DAC1, DAC3, DAC5 e NAT10 afetam a multiplicação das formas procíclicas, enquanto DAC1 e DAC5 influenciam na diferenciação das formas procíclicas para metacíclicas. DAC3, DAC5 e NAT10 estão envolvidas diretamente na diferenciação das formas procíclicas para amastigotas. Durante a diferenciação das formas amastigotas em procíclicas observamos que todas as DACs estão envolvidas, assim como no processo de invasão e multiplicação em macrófagos derivados da medula óssea. Além disso, realizamos análises de ciclo celular e verificamos NAT10 altera a duração das fases G1 e S do parasito. Por fim, a depleção das DACs altera os níveis de proteínas acetiladas. Em conjunto, nossos resultados indicam que a regulação dos níveis de acetilação proteica e de RNA é importante na diferenciação de L. mexicana, abrindo a oportunidade para novos estudos sobre as DACs e NAT10 como potenciais alvos de drogas. |
id |
UFSP_c02b3481e0c242bb8c1fd299592a5855 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repositorio.unifesp.br:11600/65084 |
network_acronym_str |
UFSP |
network_name_str |
Repositório Institucional da UNIFESP |
repository_id_str |
3465 |
spelling |
Maran, Suellen Rodrigues [UNIFESP]http://lattes.cnpq.br/2793916946082543http://lattes.cnpq.br/2131472726202687Moretti, Nilmar Silvio [UNIFESP]São Paulo2022-08-04T19:23:18Z2022-08-04T19:23:18Z2021-10-05https://repositorio.unifesp.br/xmlui/handle/11600/65084Leishmania é o agente etiológico das leishmanioses, uma doença infecciosa grave. Durante o ciclo de vida, o parasito passa por diferentes ambientes, se adaptando aos mesmos por alterações na regulação da expressão gênica, transcrição, tradução e metabolismo. A regulação da expressão gênica em tripanosomatídeos ocorre principalmente de maneira pós-transcricional, através de mecanismos de estabilização dos mRNAs e da regulação da tradução. Análises de proteômica realizadas pelo nosso grupo revelaram um perfil de acetilação diferencial de proteínas entre os três estágios principais de Leishmania mexicana (procíclico, metacíclico e amastigota) sugerindo um papel central dessa modificação na diferenciação do parasito. A acetilação de lisina é regulada por duas enzimas, lisinas acetiltransferases (KATs), que adicionam grupos acetil nos resíduos de lisina, e lisinas desacetilases (KDACs), que removem estes grupos. As KDACs são divididas em duas classes: dependentes de NAD+ (sirtuínas) e de zinco (DACs). Neste trabalho, as proteínas NAT10 do grupo das KATs e DACs (1, 3, 4 e 5) do grupo das KDACs foram selecionadas com objetivo central de investigar a importância dessas proteínas na biologia de L. mexicana. Para isso, o sistema de edição gênica CRISPR-Cas9 foi utilizado para obtenção de linhagens hemi-nocautes, nocautes e fluorescentes “tagged”. Utilizando as linhagens fluorescentes “tagged” evidenciamos que DAC1 e DAC5 são citoplasmáticas, enquanto DAC3, DAC4 e NAT10 têm localização nuclear, em todas as formas do parasito. Curiosamente, DAC3 é encontrada em regiões de eucromatina, enquanto o DAC4 ocupa predominantemente as regiões de heterocromatina. Além disso, descobrimos que DAC1, DAC3 e NAT10 são essenciais para a sobrevivência das formas procíclicas de L. mexicana. As análises fenotípicas dos parasitos mutantes revelaram que DAC1, DAC3, DAC5 e NAT10 afetam a multiplicação das formas procíclicas, enquanto DAC1 e DAC5 influenciam na diferenciação das formas procíclicas para metacíclicas. DAC3, DAC5 e NAT10 estão envolvidas diretamente na diferenciação das formas procíclicas para amastigotas. Durante a diferenciação das formas amastigotas em procíclicas observamos que todas as DACs estão envolvidas, assim como no processo de invasão e multiplicação em macrófagos derivados da medula óssea. Além disso, realizamos análises de ciclo celular e verificamos NAT10 altera a duração das fases G1 e S do parasito. Por fim, a depleção das DACs altera os níveis de proteínas acetiladas. Em conjunto, nossos resultados indicam que a regulação dos níveis de acetilação proteica e de RNA é importante na diferenciação de L. mexicana, abrindo a oportunidade para novos estudos sobre as DACs e NAT10 como potenciais alvos de drogas.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)2019/13765-1101 f.porUniversidade Federal de São PauloAcetilaçãoLeishmania mexicanaKDACsKATsac4CPapel da acetilação no ciclo de vida de Leishmania mexicanaThe role of acetylation in the Leishmania mexicana life cycleinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNIFESPinstname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)instacron:UNIFESPEscola Paulista de Medicina (EPM)Microbiologia e ImunologiaBiologia MolecularEdição gênica em tripanosomatídeosORIGINALSuellen Maran_Dissertação_final.pdfSuellen Maran_Dissertação_final.pdfDissertação_Suellen Maranapplication/pdf5121784${dspace.ui.url}/bitstream/11600/65084/1/Suellen%20Maran_Disserta%c3%a7%c3%a3o_final.pdfbe8dc6c3518c819a3cab02ecdfa93b23MD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-85805${dspace.ui.url}/bitstream/11600/65084/2/license.txtdcbc5020f913d1d37e327fb8c863a6e6MD52open accessTEXTSuellen Maran_Dissertação_final.pdf.txtSuellen Maran_Dissertação_final.pdf.txtExtracted texttext/plain154791${dspace.ui.url}/bitstream/11600/65084/3/Suellen%20Maran_Disserta%c3%a7%c3%a3o_final.pdf.txt047b22d879a1b7475a091cc949902353MD53open accessTHUMBNAILSuellen Maran_Dissertação_final.pdf.jpgSuellen Maran_Dissertação_final.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg3623${dspace.ui.url}/bitstream/11600/65084/5/Suellen%20Maran_Disserta%c3%a7%c3%a3o_final.pdf.jpg7c8fd477e95c7e83d7f4a681b2b3e387MD55open access11600/650842022-10-05 12:01:22.663open accessoai:repositorio.unifesp.br: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ório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.unifesp.br/oai/requestopendoar:34652022-10-05T15:01:22Repositório Institucional da UNIFESP - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)false |
dc.title.pt_BR.fl_str_mv |
Papel da acetilação no ciclo de vida de Leishmania mexicana |
dc.title.alternative.en.fl_str_mv |
The role of acetylation in the Leishmania mexicana life cycle |
title |
Papel da acetilação no ciclo de vida de Leishmania mexicana |
spellingShingle |
Papel da acetilação no ciclo de vida de Leishmania mexicana Maran, Suellen Rodrigues [UNIFESP] Acetilação Leishmania mexicana KDACs KATs ac4C |
title_short |
Papel da acetilação no ciclo de vida de Leishmania mexicana |
title_full |
Papel da acetilação no ciclo de vida de Leishmania mexicana |
title_fullStr |
Papel da acetilação no ciclo de vida de Leishmania mexicana |
title_full_unstemmed |
Papel da acetilação no ciclo de vida de Leishmania mexicana |
title_sort |
Papel da acetilação no ciclo de vida de Leishmania mexicana |
author |
Maran, Suellen Rodrigues [UNIFESP] |
author_facet |
Maran, Suellen Rodrigues [UNIFESP] |
author_role |
author |
dc.contributor.authorLattes.pt_BR.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/2793916946082543 |
dc.contributor.advisorLattes.pt_BR.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/2131472726202687 |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Maran, Suellen Rodrigues [UNIFESP] |
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv |
Moretti, Nilmar Silvio [UNIFESP] |
contributor_str_mv |
Moretti, Nilmar Silvio [UNIFESP] |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Acetilação Leishmania mexicana KDACs KATs ac4C |
topic |
Acetilação Leishmania mexicana KDACs KATs ac4C |
description |
Leishmania é o agente etiológico das leishmanioses, uma doença infecciosa grave. Durante o ciclo de vida, o parasito passa por diferentes ambientes, se adaptando aos mesmos por alterações na regulação da expressão gênica, transcrição, tradução e metabolismo. A regulação da expressão gênica em tripanosomatídeos ocorre principalmente de maneira pós-transcricional, através de mecanismos de estabilização dos mRNAs e da regulação da tradução. Análises de proteômica realizadas pelo nosso grupo revelaram um perfil de acetilação diferencial de proteínas entre os três estágios principais de Leishmania mexicana (procíclico, metacíclico e amastigota) sugerindo um papel central dessa modificação na diferenciação do parasito. A acetilação de lisina é regulada por duas enzimas, lisinas acetiltransferases (KATs), que adicionam grupos acetil nos resíduos de lisina, e lisinas desacetilases (KDACs), que removem estes grupos. As KDACs são divididas em duas classes: dependentes de NAD+ (sirtuínas) e de zinco (DACs). Neste trabalho, as proteínas NAT10 do grupo das KATs e DACs (1, 3, 4 e 5) do grupo das KDACs foram selecionadas com objetivo central de investigar a importância dessas proteínas na biologia de L. mexicana. Para isso, o sistema de edição gênica CRISPR-Cas9 foi utilizado para obtenção de linhagens hemi-nocautes, nocautes e fluorescentes “tagged”. Utilizando as linhagens fluorescentes “tagged” evidenciamos que DAC1 e DAC5 são citoplasmáticas, enquanto DAC3, DAC4 e NAT10 têm localização nuclear, em todas as formas do parasito. Curiosamente, DAC3 é encontrada em regiões de eucromatina, enquanto o DAC4 ocupa predominantemente as regiões de heterocromatina. Além disso, descobrimos que DAC1, DAC3 e NAT10 são essenciais para a sobrevivência das formas procíclicas de L. mexicana. As análises fenotípicas dos parasitos mutantes revelaram que DAC1, DAC3, DAC5 e NAT10 afetam a multiplicação das formas procíclicas, enquanto DAC1 e DAC5 influenciam na diferenciação das formas procíclicas para metacíclicas. DAC3, DAC5 e NAT10 estão envolvidas diretamente na diferenciação das formas procíclicas para amastigotas. Durante a diferenciação das formas amastigotas em procíclicas observamos que todas as DACs estão envolvidas, assim como no processo de invasão e multiplicação em macrófagos derivados da medula óssea. Além disso, realizamos análises de ciclo celular e verificamos NAT10 altera a duração das fases G1 e S do parasito. Por fim, a depleção das DACs altera os níveis de proteínas acetiladas. Em conjunto, nossos resultados indicam que a regulação dos níveis de acetilação proteica e de RNA é importante na diferenciação de L. mexicana, abrindo a oportunidade para novos estudos sobre as DACs e NAT10 como potenciais alvos de drogas. |
publishDate |
2021 |
dc.date.issued.fl_str_mv |
2021-10-05 |
dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2022-08-04T19:23:18Z |
dc.date.available.fl_str_mv |
2022-08-04T19:23:18Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/masterThesis |
format |
masterThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
https://repositorio.unifesp.br/xmlui/handle/11600/65084 |
url |
https://repositorio.unifesp.br/xmlui/handle/11600/65084 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.none.fl_str_mv |
101 f. |
dc.coverage.spatial.pt_BR.fl_str_mv |
São Paulo |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal de São Paulo |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal de São Paulo |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da UNIFESP instname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) instacron:UNIFESP |
instname_str |
Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
instacron_str |
UNIFESP |
institution |
UNIFESP |
reponame_str |
Repositório Institucional da UNIFESP |
collection |
Repositório Institucional da UNIFESP |
bitstream.url.fl_str_mv |
${dspace.ui.url}/bitstream/11600/65084/1/Suellen%20Maran_Disserta%c3%a7%c3%a3o_final.pdf ${dspace.ui.url}/bitstream/11600/65084/2/license.txt ${dspace.ui.url}/bitstream/11600/65084/3/Suellen%20Maran_Disserta%c3%a7%c3%a3o_final.pdf.txt ${dspace.ui.url}/bitstream/11600/65084/5/Suellen%20Maran_Disserta%c3%a7%c3%a3o_final.pdf.jpg |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
be8dc6c3518c819a3cab02ecdfa93b23 dcbc5020f913d1d37e327fb8c863a6e6 047b22d879a1b7475a091cc949902353 7c8fd477e95c7e83d7f4a681b2b3e387 |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UNIFESP - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
repository.mail.fl_str_mv |
|
_version_ |
1802764200400912384 |