Análises de glicoesfingolipídeos em diferentes espécies do fungo patogênico do gênero Aspergillus

• Autor(a) principal: Rodrigues, Karolina Marques [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=6326368; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/53060
• topic: Aspergillus; Glicoesfingolipídeos; Fungos; Lpídeos; Aspergillus; Glycosphingolipids; Fungi; Lipids

A incidência de infeções fúngicas graves tem aumentado na última década, principalmente devido ao aumento do número de doentes imunodeprimidos, representando uma séria causa de morbidade e mortalidade nesta população. Trabalhos recentes mostram que os fungos são vulneráveis a inibidores da biossíntese de esfingolipídeos, o que nos levou a estudar as estruturas de glicoesfingolípideos fúngicos, visando obter informacões relevantes sobre a biossíntese e papéis funcionais dessas moléculas e propor novos alvos potenciais para tratamento antifungico. Glicosilinositol fosforilceramidas (GIPCs), inositolfosforilceramidas (IPCs), e monohexosil ceramidas (CMHs) de A. fumigatus, A. flavus, A. niger e A. nidulans, fungos filamentosos causadores da aspergilose, foram extraídos, purificados e caracterizados utilizandose métodos cromatográficos, bioquímicos e espectrometria de massas. Por espectrometria de massas utilizando ionização por eletrospray (EISMS), em modo positivo, foram identificados para todas as espécies analisadas dois picos majoritários correspondentes aos CMHs 754 m/z e 756 m/z. Por dissociação induzida por colisão (CID) foram identificados para o CMH 754 m/z fragmentos de m/z: 736, 574, 556 e 276. De maneira semelhante para CMH m/z 756, foram identificados fragmentos de m/z 738, 576, 558 e 276. O padrão de fragmentação para ambas as CMHs corresponde, respectivamente, a [M+H1H2O]+, [M+H1H2OHex]+, [M+H2H2OHex]+, [M+H2H2Oacil]+, sendo os fragmentos associados com CMH contendo ceramida, com estruturas não descritas em CMH de mamíferos, d19:2/h18:1 e d19:2/18:0, respectivamente. Glucosilceramida e galactosilceramida foram caracterizadas por cromatografia de alta resolução em camada delgada (HPTLC). Foi possível identificar 2 espécies diferentes de IPCs [M+H]+, 926 m/z, e 954 m/z, apresentando fragmentos 282 m/z e 310 m/z referentes a esfingosina t18:0 e t20:0, respectivamente. A presença de inositol foi confirmada utilizando espectrometria de massas em modo do íon precursor para 241 m/z, referente ao grupo inositol fosfato dessas estruturas. Para a caracterização dos GIPCs nas diferentes espécies de Aspergillus, utilizamos a dissociação induzida por colisão (CID) em tandem MS com ionização por eletropray (ESI), no modo positivo [M+H]+. Desta maneira pudemos detectar os íons 1088 m/z e 1116 m/z que correspondem a GIPCs com 1 hexose; 1250 m/z e 1278 m/z, GIPCs com 2 hexoses; 1412 m/z e 1440 m/z, que correspondem a GIPCs contendo com 3 hexoses. Os GIPCs presentes A. fumigatus, A. flavus e A. niger derivam do IPC 926 m/z (contendo ceramida 666 m/z) e do IPC 954 m/z (contendo ceramida 694 m/z),por outro lado, os GIPCs de A. nidulans derivam apenas do IPC 926 m/z. A presença de resíduos de galactofuranose nos GIPCs, foi confirmada utilizando o anticorpo monoclonal MEST1 que reconhece resíduos terminais de galactofuranose. Pela imunocoloração das placas de HPTLC com MEST1 os GIPCs de A. fumigatus, A. flavus e A. niger, que apresentaram um componente reconhecido pelo mAb MEST1, que possuem a mesma migração cromatográfica que o GIPC denominado Pb1 de Paracoccidioides brasiliensis. Já para o A. nidulans, somente pequena reatividade com mAb MEST1 foi detectada. Estes resultados indicam que, nas quatro espécies estudadas, tanto os CMHs, quanto os IPCs e GIPCs, apresentam estruturas não expressas em mamíferos, indicando que estas moléculas bem como as enzimas específicas envolvidas no metabolismo desses esfingolipídeos, podem ser considerados como alvos para tratamento antifúngico.