Obtenção de nanopartículas de PMMAbPDMAEMA para sistemas de liberação controlada de moléculas bioativas
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2018 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNIFESP |
Texto Completo: | https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=6326457 https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/53050 |
Resumo: | A associação do PMMA (polimetacrilato de metila), polímero solúvel em solventes orgânicos, e o PDMAEMA (poli2dimetilamina metacrilato de etila), solúvel em água, gera um copolímero anfifílico de propriedades dependentes do pH e com tendência de formação de micelas. O objetivo deste trabalho foi obter e caracterizar nanopartículas (NPs) deste copolímero para veicular DNA plasmidial para células HEK 293T como forma de demonstrar sua eficiência no processo de transfecção celular. As metodologias testadas para o preparo das NPs foram adaptações da emulsificação com evaporação de solvente, da salting out e da nanoprecipitação. A caracterização das NPs foi feita pela avaliação de tamanho e potencial zeta (PZ), pela análise de espectros de FTIR e por estudos de DSC das suspensões obtidas. Rodamina 6G (Rd6G) foi encapsulada para estudo de microscopia de altaresolução SR GSD 3D. Para os testes de estabilidade, foram monitoradas suspensões das NPs em água a 37 °C durante 30 dias. O método da nanoprecipitação foi o mais eficiente não apresentando perda de massa, com NPs entre 60–100 nm e PZ de 20 a 30 mV. O FTIR apresentou o mesmo perfil para o polímero e as NPs Os estudos de estabilidade mostraram que as NPs em meio aquoso apresentaram estabilidade de tamanho e PZ. A microscopia GSD mostra a presença de NPs fluorescentes com característica esférica. Também indicam que os sistemas de perfil equilibrado das frações hidrofílicas e hidrofóbicas dos copolímeros é importante na sua aplicação como veiculador de DNA. A nanoprecipitação foi a melhor metodologia de obtenção de NPs de PMMAPDMAEMA. As NPs do copolímero 1:1 e 2:1 se mostraram mais eficientes na aplicação como agentes de transfecção de DNA Plasmidial em sistemas com células do tipo HEK 293T. |
id |
UFSP_c5dff24b98aa7ab08f8510cf56771a56 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repositorio.unifesp.br:11600/53050 |
network_acronym_str |
UFSP |
network_name_str |
Repositório Institucional da UNIFESP |
repository_id_str |
3465 |
spelling |
Engelmann, Klauss [UNIFESP]Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)http://lattes.cnpq.br/9473928414675346http://lattes.cnpq.br/2250091739407083Daghastanli, Katia Regina Perez [UNIFESP]São Paulo2020-03-25T12:10:53Z2020-03-25T12:10:53Z2018-06-28https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=6326457https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/530502018-0995.pdfA associação do PMMA (polimetacrilato de metila), polímero solúvel em solventes orgânicos, e o PDMAEMA (poli2dimetilamina metacrilato de etila), solúvel em água, gera um copolímero anfifílico de propriedades dependentes do pH e com tendência de formação de micelas. O objetivo deste trabalho foi obter e caracterizar nanopartículas (NPs) deste copolímero para veicular DNA plasmidial para células HEK 293T como forma de demonstrar sua eficiência no processo de transfecção celular. As metodologias testadas para o preparo das NPs foram adaptações da emulsificação com evaporação de solvente, da salting out e da nanoprecipitação. A caracterização das NPs foi feita pela avaliação de tamanho e potencial zeta (PZ), pela análise de espectros de FTIR e por estudos de DSC das suspensões obtidas. Rodamina 6G (Rd6G) foi encapsulada para estudo de microscopia de altaresolução SR GSD 3D. Para os testes de estabilidade, foram monitoradas suspensões das NPs em água a 37 °C durante 30 dias. O método da nanoprecipitação foi o mais eficiente não apresentando perda de massa, com NPs entre 60–100 nm e PZ de 20 a 30 mV. O FTIR apresentou o mesmo perfil para o polímero e as NPs Os estudos de estabilidade mostraram que as NPs em meio aquoso apresentaram estabilidade de tamanho e PZ. A microscopia GSD mostra a presença de NPs fluorescentes com característica esférica. Também indicam que os sistemas de perfil equilibrado das frações hidrofílicas e hidrofóbicas dos copolímeros é importante na sua aplicação como veiculador de DNA. A nanoprecipitação foi a melhor metodologia de obtenção de NPs de PMMAPDMAEMA. As NPs do copolímero 1:1 e 2:1 se mostraram mais eficientes na aplicação como agentes de transfecção de DNA Plasmidial em sistemas com células do tipo HEK 293T.The combination of PMMA, a polymer soluble in organic solvents, and with the watersoluble PDMAEMA, generates an amphiphilic copolymer with pHdependent properties and tendency to form micelles. The aim of this work is to obtain and characterize nanoparticles (NPs) of this copolymer to transport plasmid DNA into HEK 293T cells as a way to demonstrate its efficiency for gene transfection The methodologies tested for the preparation of NPs were adapted emulsification with evaporation of solvent, salting out and nanoprecipitation. The characterization of NPs was done by size and zeta potential (PZ) measurements, FTIR spectra analysis and DSC studies of the obtained suspensions. Rhodamine 6G (Rd6G) was encapsulated to be used in superresolution SR GSD 3D microscopy studies. For stability tests, NPs suspensions were kept at 37 °C and monitored for 30 days. The nanoprecipitation method was the most efficient to prepare NPs with no loss of mass, yielding NPs sized between 60100 nm and PZ from 20 to 30 mV. The FTIR showed the same profile for the polymer and the NPs. The stability studies monitoring the size and ZP of the particles showed that the NPs in aqueous medium are stable for 30 days. GSD microscopy shows the presence of fluorescent NPs with spherical characteristics. They also indicate that the balanced profile systems of the hydrophilic and hydrophobic fractions of the copolymers is important in their application as a DNA carrier. Nanoprecipitation was the best methodology to obtain PMMAbPDMAEMA NPs. The 1: 1 and 2: 1 copolymer NPs were shown to be more efficient at application as Plasmidial DNA transfection agents in systems with HEK 293T cell typeCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2018)65 f.porUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)NanopartículasPMMA-b-PDMAEMALiberação controladaTerapia gênicaNanoparticlesControlled releaseGene therapyObtenção de nanopartículas de PMMAbPDMAEMA para sistemas de liberação controlada de moléculas bioativasProduction of PMMAbPDMAEMA nanoparticles for controlled release systems of bioactive moleculesinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisDoutoradoinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNIFESPinstname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)instacron:UNIFESPSão Paulo, Escola Paulista de MedicinaCiências Biológicas (Biologia Molecular)Ciências BiológicasEstrutura, Atividades e Sintese de Peptideos e ProteinasORIGINALKlauss Engelmann - A.pdfKlauss Engelmann - A.pdfTese de doutoradoapplication/pdf2789880${dspace.ui.url}/bitstream/11600/53050/1/Klauss%20Engelmann%20-%20A.pdf5d8b8c46052c42275ba4017b75c7f528MD51open access11600/530502023-07-05 09:25:39.856open accessoai:repositorio.unifesp.br:11600/53050Repositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.unifesp.br/oai/requestopendoar:34652023-07-05T12:25:39Repositório Institucional da UNIFESP - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)false |
dc.title.pt_BR.fl_str_mv |
Obtenção de nanopartículas de PMMAbPDMAEMA para sistemas de liberação controlada de moléculas bioativas |
dc.title.alternative.none.fl_str_mv |
Production of PMMAbPDMAEMA nanoparticles for controlled release systems of bioactive molecules |
title |
Obtenção de nanopartículas de PMMAbPDMAEMA para sistemas de liberação controlada de moléculas bioativas |
spellingShingle |
Obtenção de nanopartículas de PMMAbPDMAEMA para sistemas de liberação controlada de moléculas bioativas Engelmann, Klauss [UNIFESP] Nanopartículas PMMA-b-PDMAEMA Liberação controlada Terapia gênica Nanoparticles Controlled release Gene therapy |
title_short |
Obtenção de nanopartículas de PMMAbPDMAEMA para sistemas de liberação controlada de moléculas bioativas |
title_full |
Obtenção de nanopartículas de PMMAbPDMAEMA para sistemas de liberação controlada de moléculas bioativas |
title_fullStr |
Obtenção de nanopartículas de PMMAbPDMAEMA para sistemas de liberação controlada de moléculas bioativas |
title_full_unstemmed |
Obtenção de nanopartículas de PMMAbPDMAEMA para sistemas de liberação controlada de moléculas bioativas |
title_sort |
Obtenção de nanopartículas de PMMAbPDMAEMA para sistemas de liberação controlada de moléculas bioativas |
author |
Engelmann, Klauss [UNIFESP] |
author_facet |
Engelmann, Klauss [UNIFESP] |
author_role |
author |
dc.contributor.institution.pt_BR.fl_str_mv |
Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
dc.contributor.authorLattes.none.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/9473928414675346 |
dc.contributor.advisorLattes.none.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/2250091739407083 |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Engelmann, Klauss [UNIFESP] |
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv |
Daghastanli, Katia Regina Perez [UNIFESP] |
contributor_str_mv |
Daghastanli, Katia Regina Perez [UNIFESP] |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Nanopartículas PMMA-b-PDMAEMA Liberação controlada Terapia gênica |
topic |
Nanopartículas PMMA-b-PDMAEMA Liberação controlada Terapia gênica Nanoparticles Controlled release Gene therapy |
dc.subject.eng.fl_str_mv |
Nanoparticles Controlled release Gene therapy |
description |
A associação do PMMA (polimetacrilato de metila), polímero solúvel em solventes orgânicos, e o PDMAEMA (poli2dimetilamina metacrilato de etila), solúvel em água, gera um copolímero anfifílico de propriedades dependentes do pH e com tendência de formação de micelas. O objetivo deste trabalho foi obter e caracterizar nanopartículas (NPs) deste copolímero para veicular DNA plasmidial para células HEK 293T como forma de demonstrar sua eficiência no processo de transfecção celular. As metodologias testadas para o preparo das NPs foram adaptações da emulsificação com evaporação de solvente, da salting out e da nanoprecipitação. A caracterização das NPs foi feita pela avaliação de tamanho e potencial zeta (PZ), pela análise de espectros de FTIR e por estudos de DSC das suspensões obtidas. Rodamina 6G (Rd6G) foi encapsulada para estudo de microscopia de altaresolução SR GSD 3D. Para os testes de estabilidade, foram monitoradas suspensões das NPs em água a 37 °C durante 30 dias. O método da nanoprecipitação foi o mais eficiente não apresentando perda de massa, com NPs entre 60–100 nm e PZ de 20 a 30 mV. O FTIR apresentou o mesmo perfil para o polímero e as NPs Os estudos de estabilidade mostraram que as NPs em meio aquoso apresentaram estabilidade de tamanho e PZ. A microscopia GSD mostra a presença de NPs fluorescentes com característica esférica. Também indicam que os sistemas de perfil equilibrado das frações hidrofílicas e hidrofóbicas dos copolímeros é importante na sua aplicação como veiculador de DNA. A nanoprecipitação foi a melhor metodologia de obtenção de NPs de PMMAPDMAEMA. As NPs do copolímero 1:1 e 2:1 se mostraram mais eficientes na aplicação como agentes de transfecção de DNA Plasmidial em sistemas com células do tipo HEK 293T. |
publishDate |
2018 |
dc.date.issued.fl_str_mv |
2018-06-28 |
dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2020-03-25T12:10:53Z |
dc.date.available.fl_str_mv |
2020-03-25T12:10:53Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
format |
doctoralThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.pt.fl_str_mv |
https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=6326457 |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/53050 |
dc.identifier.file.none.fl_str_mv |
2018-0995.pdf |
url |
https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=6326457 https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/53050 |
identifier_str_mv |
2018-0995.pdf |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.none.fl_str_mv |
65 f. |
dc.coverage.spatial.none.fl_str_mv |
São Paulo |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da UNIFESP instname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) instacron:UNIFESP |
instname_str |
Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
instacron_str |
UNIFESP |
institution |
UNIFESP |
reponame_str |
Repositório Institucional da UNIFESP |
collection |
Repositório Institucional da UNIFESP |
bitstream.url.fl_str_mv |
${dspace.ui.url}/bitstream/11600/53050/1/Klauss%20Engelmann%20-%20A.pdf |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
5d8b8c46052c42275ba4017b75c7f528 |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UNIFESP - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
repository.mail.fl_str_mv |
|
_version_ |
1802764193411104768 |