Importância do gene WEE1 e efeitos da sua inibição na sobrevida de células-tronco tumorais do Mieloma Múltiplo

• Autor(a) principal: Dantas, Rebecca Silveira Santos Barbosa [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7859404; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59541
• topic: Mieloma Múltiplo; Células-Tronco Tumorais; WEE1; MK-1775; Multiple Myeloma; Tumor Stem Cells; WEE1; MK-1775

Introdução: O mieloma múltiplo (MM) é caracterizado pela infiltração de plasmócitos tumorais na medula óssea (MO), síntese e secreção de imunoglobulinas monoclonais e dano tecidual. A presença de células-tronco tumorais (CSCs) é apontada como a causa predominante na resistência à terapia e recidivas em câncer, sendo assunto ainda pouco explorado no MM. Em estudos anteriores do nosso grupo, as células-tronco tumorais do MM (MM-CSCs) foram isoladas com base na expressão dos marcadores CD138, CD34, CD19 e ALDH1. Após a análise da expressão de genes de stemness por PCR array, 82% dos genes apresentaram expressão diferencial entre MM-CSCs e plasmócitos tumorais em amostras de pacientes. Entre eles, o gene WEE1 que é responsável pelo reparo de DNA na fase G2 do ciclo celular, foi identificado como hiperexpresso em MM-CSCs em relação a plasmócitos tumorais. Assim, nossos resultados sugerem a molécula WEE1 como possível alvo terapêutico que pode ser explorado no MM. Objetivos: Identificar a presença de possíveis MM-CSCs em linhagens de MM, avaliar a expressão do gene WEE1 nessas células e realizar estudos funcionais para verificar o efeito da inibição desse gene na viabilidade celular e seu potencial como alvo-terapêutico. Material e Métodos: As linhagens celulares de MM foram submetidas a sorting por citometria de fluxo (CD138-/CD19+/CD34+/ALDH1+) para identificar MM-CSCs e à cultura em soft ágar para avaliar a formação de microesferas. A expressão de WEE1 foi avaliada nas linhagens celulares por PCR quantitativo em tempo real (qPCR). Após o tratamento com o inibidor de WEE1 (MK-1775), com ou sem tratamento prévio com inibidor de proteassoma (bortezomibe), avaliamos a viabilidade celular através do teste funcional Prestoblue, e a indução de apoptose e o ciclo celular por citometria de fluxo. Resultados: Identificamos a presença de MM-CSCs (CD138-/CD34+/ALDH1+, sendo o CD19 negativo em quatro linhagens selvagens de MM), e a formação de microesferas em soft ágar utilizando RPMI-8226, U266 e SKO-007. Todas as linhagens de MM apresentaram expressão de WEE1 por qPCR. As linhagens celulares RPMI-8226 e U266 mostraram 50% de redução na viabilidade celular após 24 horas de incubação com MK-1775, nas concentrações de 5μM e 20 μM, respectivamente. A linhagem SKO-007 apresentou dose e tempo dependência. A terapia combinada com bortezomibe e MK-1775 aboliu a formação de microesferas em soft ágar nas linhagens RPMI-8226 (também responsiva ao uso isolado dos dois fármacos) e U266, mas a linhagem SKO-007 foi resistente a todos os fármacos, isoladas e combinadas. O tratamento das linhagens com bortezomibe seguido de MK-1775 (tratamento sequencial) versus uso isolado de bortezomibe demonstrou impacto estatisticamente significante na apoptose total: 88,8% vs 74,1% na RPMI-8222; 92,5% vs 86,6% na U266; e 60,2% 30,9% na SKO-007 (p< 0,05). Conclusão: A combinação sequencial dos fármacos bortezomibe e do inibidor de WEE1, MK-1775, induziu apoptose nas linhagens celulares RPMI-8226, U266 e, principalmente, na SKO-007, de forma mais eficiente do que o uso dos fármacos isolados, evidenciando seu efeito na inibição de proliferação de células tumorais em linhagens celulares de MM e, potencialmente, das MM-CSCs.