Perfil de micrornas circulantes e gravidade em pacientes com anemia falciforme

• Autor(a) principal: Biassi, Thais Priscila [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7260763; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/53131
• topic: Anemia falciforme; Biomarcadores; Microrna circulantes gravidade na anemia falciforme; Sickle anemia; Biomarkers; Circulating micrornas gravity in sickle cell anemia

Introdução: A anemia falciforme (AF) é uma doença complexa, associada à hemólise, vasooclusão, inflamação vascular e ativação endotelial. A morbidade significativa e a mortalidade prematura são características marcantes da doença e a elevação da velocidade do regurgitante tricúspide (VTR), determinada pelo ecodopplercardiograma, tem sido associada a maior risco. A identificação de biomarcadores associados à gravidade na SCA é desejável. Os microRNAs séricos circulantes (miRNA) são alvos moleculares estudados em diferentes doenças como marcadores diagnósticos ou prognósticos, no entanto, existem poucos estudos em SCA. Objetivo: identificar assinaturas específicas de miRNAs em amostras de plasma de pacientes com AF de acordo com os índices de gravidade. Métodos: A triagem da expressão dos miRNAs foi realizada em 8 pacientes. Esses pacientes foram classificados pela medida TRV (referido como TRV Score): 4 amostras com TVR ≥ 2,5 m/s e 4 com TRV <2,5 m/s. Após a extração do RNA total, as amostras foram analisadas por PCR em tempo real usando Megaplex RT Human Pool A e Megaplex RTHuman Pool Blife (Thermofisher) compreendendo 667 miRNAs distintos. O software Expression Suite (Thermofisher) e o SPSS foram utilizados para análise. Dezessete miRNAs foram diferencialmente expressos entre os dois grupos (p <0,05) e miR16 foi considerado o candidato endógeno. Cinco miRNAs diferencialmente expressos (miR15b, miR502, miR510, miR544, miR629) foram selecionados para validação em 56 amostras de pacientes utilizando o TRV Score. Outros dois escores de gravidade também foram utilizados: (a) Pontuação de Lesão Orgânica (SLO) baseada na presença ou ausência de 5 lesões: acidente vascular cerebral, TRV ≥ 2,5 m / s, úlceras de perna, osteonecrose e microalbuminúria (adaptado de AfenyiAnnan). et al., Transfusion 2008; 48: 197) e (b) NIH Bayesian score disponível online (http://bios.ugr.es/dsscalculator/). A curva ROC foi utilizada para analisar os dados de expressão relativa (2ΔCT) de cada miRNA. Resultados: Dois dos cinco miRNA, miR510 e miR629, foram significativamente diminuídos em pacientes mais graves. A expressão do miR510 permitiu a discriminação dos pacientes de acordo com o TRV Score no cutoff 0,000367664, sensibilidade 68,4%, especificidade 81,2% e 0,773 (95% IC: 0,6110,935, p = 0,006). O mesmo miRNA também foi um bom discriminante no SLO em um ponto de corte de 0,000331043, sensibilidade de 70,6%, especificidade de 72,2% e área sob a curva (AUC) de 0,716 (95% CI: 0,5370,894) p = 0,029. O miR629 foi relacionado à gravidade de acordo com o escore bayesiano no ponto de corte de 0,0009854449, sensibilidade de 66,7%, especificidade de 75% e AUC de 0,729 (IC 95%: 0,5270,897, p = 0,047). Os outros miRNAs, miR15b, miR502 e miR544, não apresentaram resultados significativos. Discussão e Conclusões: Este é o primeiro estudo que analisa o miRNA plasmático como um biomarcador da gravidade da SCA. O miR510 regula a Peroxirredoxina1 (PRDX1), uma proteína envolvida na oxidação do estresse. O aumento do estresse oxidativo apresentado na SCA pode implicar que o miR510 tem um papel nesse mecanismo. O miR629 parece estar envolvido na via de sinalização de AKT1 relacionada à endotelina1. Como é sabido, a endotelina1 está aumentada na AF e é importante na hipertensão pulmonar. Os miR510 e miR629 parecem estar hipoexpressos em pacientes com AF mais grave, provavelmente com maior importância na regulação das manifestações clínicas associadas à doença vascular, embora mais estudos pareçam ser necessários.