Ação de proteínas isoladas de plantas na hemostasia e trombose

• Autor(a) principal: Salu, Bruno Ramos [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5022199; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50552
• topic: Inibidores de protease; Fator XIa; Trombose; Fator XIIa; Calicreína plasmática; Protease inhibitors; Factor XIa; Thrombosis; Factor XIIa; Plasma kallikrein

A utilização de inibidores de origem vegetal em ensaios de coagulação sanguínea, trombose e inflamação contribui para determinar a função específica de enzimas no processo de hemostase e, em consequência, pode levar ao desenvolvimento de drogas antitrombóticas. Os inibidores isolados de Enterolobium contortisiliquum (EcTI), Oelonix regia (DrTI), Acacia schweinfurthii (ASTI), e a proteína bifuncional CrataBL, uma lectina com atividade inibitória extraída da entrecasca Crataeva tapia, inibem distintas proteases como aquelas da coagulação. Nosso objetivo foi estabelecer a relação entre estrutura e atividade dessas proteínas e os seus efeitos na formação de trombos. Os inibidores foram purificados por cromatografias de troca iônica, exclusão molecular e afinidade. A homogeneidade das preparações foi avaliada por SDS-PAGE, cromatografia em fase reversa e espectrometria de massa, dependendo de cada inibidor. A atividade, na coagulação, foi medida pelo tempo de tromboplastina parcialmente ativada (TIPa) e tempo de trombina (TP); na agregação plaquetária, in vitro e ex vivo; nos modelos de trombose arterial, via injeção de rosa de bengala em camundongos e de trombose venosa, via ligadura de veia cava em ratos, para a estimativa da formação de trombos in vivo. DrTI, AsTI e EcTI aumentaram o aPTT no piasma humano devido à inibição de huPK. DrTI difere de AsTI e EcTI pela inibição de FXla, com um Kiapp de 1,3 nM, indicando a natureza dinâmica dos seus sítios reativos. DrTI, AsTI, EcTI ~. CrataBL prolongaram significativamente o tempo de oclusão total da artéria carótida de ratos em comparação com o grupo controle NaCI. EcTI também foi eficaz em diminuir o trombo venoso (74%, 2 mg/kg). Os efeito de DrTI, AsTI e EcTI podem ser atribuídos à suas atividades sobre as enzimas da fase de contato da coagulação sanguínea e, no caso de DrTI, AsTI e CrataBL, associados à inibição plaquetária, uma vez que estas proteínas inibiram a agregação plaquetária induzida por ADP de ratos, ex vivo. Embora CrataBL tenha fraco efeito inibitório sobre o FXa, apresenta potente efeito neutralizador da atividade da heparina. Em conclusão, os compostos mostraram ação antitrombótica em diferentes modelos experimentais de trombose arterial e venosa, todos interferiam na via intrínseca, mas não na via extrínseca da coagulação. Somente CrataBL foi capaz de interagir e neutralizar o efeito da heparina. Nenhuma das proteínas estudadas alterou o tempo de sangramento, sugerindo serem substâncias com potencial valor terapêutico, inibindo o desenvolvimento das tromboses, com menor efeito hemorrágico. Suporte FAPESP, CNPq, CAPES. Comitê ética N° 179311