Formação de vacúolos quiméricos com leishmania amazonensis e trypanosoma cruzi e participação da subunidade d2 da ATPase vacuolar na biogênese dos vacúolos parasitóforos de leishmania amazonensis

• Autor(a) principal: Pessoa, Carina Carraro [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2331396; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47174
• topic: Leishmania amazonensis; Trypanosoma cruzi; Adenosina trifosfatases; Vacúolos quiméricos; Vacúolos parasitóforos

De modo a investigar a influência de um vacúolo personalizado por um primeiro patógeno na sobrevida e diferenciação de um segundo, desenvolvemos um modelo in vitro de coinfecção intracelular envolvendo L. (L.) amazonensis e T. cruzi em macrófagos RAW 264.7. Foi possível demonstrar a formação de vacúolos quiméricos contendo os dois parasitas, pelo registro videomicrográfico da transferência, diferenciação e multiplicação de T. cruzi no interior do VP de L. (L.) amazonensis. Considerando que o VP recipiente de L. (L.) amazonensis é um compartimento acidificado pela ação das v-ATPases, desenvolvemos um modelo de macrófago RAW 264.7 silenciado para a subunidade d2 da v-ATPase (ATP6V0d2), de modo a verificar se a acidificação vacuolar é decisiva para a diferenciação deste parasita e também de T. cruzi no modelo de dupla infecção. Demonstramos que o tamanho dos VPs de L. (L.) amazonensis foi drasticamente reduzido nos macrófagos silenciados para esta subunidade das V-ATPases, não sendo observados os vacúolos quiméricos após a coinfecção com o T. cruzi. Contudo, na infecção nos macrófagos nocauteados até a interferência da ATP6V0d2 aumentou a multiplicação dos amastigotas no VP e induziu a formação de vacúolos tight-fitting. O silenciamento desta subunidade não interferiu na acidificação de fagolisossomos, mas provocou a inibição do processamento de precursores da forma madura da catepsina D, a inibição da atividade enzimática da lipase ácida lisossomal e diminuição da concentração celular de colesterol. Os resultados obtidos demonstram que o VP característico da L. (L.) amazonensis dá suporte à diferenciação de o T. cruzi, e que o crescimento típico dos VPs desenvolvidos por esta espécie de Leishmania é dependente da subunidade V0d2 das v-ATPases.