Caracterização molecular da formação de biofilme por Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) O119

• Autor(a) principal: Flores, Maricelia Navarro Pinheiro [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7352879; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59351
• topic: EPEC; Biofilme; EPEC; Mutagênese; Biofilm

Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é subdividida em típica (tEPEC) e atípica (aEPEC), tendo por base a presença ou ausência do plasmídio EAF (EPEC adherence factor), respectivamente. A adesão a células epiteliais formando microcolônias é uma característica marcante de EPEC, sendo uma das etapas iniciais no desenvolvimento de biofilmes. Em nosso laboratório, foi investigada a capacidade de formação de biofilme em uma coleção de 223 amostras de EPEC (70 típicas e 153 atípicas) pertencentes ou não aos sorogrupos clássicos de EPEC. A capacidade de aderir a superfície abiótica foi observada em 11 tEPEC e 37 EPEC, a maioria pertencente aos sorogrupos clássicos de EPEC, sendo O119 o mais frequente. Análise inicial de mutantes obtidos por mutagênese da amostra de aEPEC A111 (O119:HNT) identificou mutantes não formadores de biofilme apresentando inserção do transposon em genes da fímbria tipo I. Desta forma, este estudo teve como objetivo dar continuidade aos estudos de nosso laboratório, caracterizando os determinantes genéticos envolvidos na formação de biofilme de uma amostra de tEPEC. Esse estudo teve início com a escolha da amostra no grupo das tEPEC caracterizadas anteriormente como formadoras de biofilme. Os resultados dos ensaios de quantificação da formação de bioflme demonstraram que das 11 amostras, três amostras (T13, T29 e T31) apresentaram biofilme forte e oito amostras apresentaram biofilme moderado a 37ºC em meio Luria-Bertani sem sal. A amostra T29 (O119:H6) foi selecionada para o estudo genético por apresentar um biofilme mais forte em relação as amostras T13 e T31 e formar uma película densa na interface ar-líquido. A amostra T29 foi mutagenizada com o transposon mini-Tn10, sendo identificados 4 mutantes (M6, M21, M160 e M175) que perderam a capacidade de formar biofilme em superfície de poliestireno e película na interface líquido-ar. O DNA flanqueado pela inserção do transposon foi clonado no vetor plasmidial pUC19. A análise da sequência de 529 pb, obtida a partir do sequenciamento do clone M6.1 revelou homologia com a enzima aspartato amônia liase. A análise da sequência de 322 pb, obtida a partir do sequenciamento do clone M21.1 identificou o gene fimD relacionado a fímbria tipo 1 Estudos estão em andamento com os mutantes M160 e M175.