Consequências funcionais da superexpressão de 6-O-endossulfatases de heparam sulfato em linhagens celulares de cânceres colorretal e de próstata humanos

• Autor(a) principal: Vicente, Carolina Meloni [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/23081
• topic: Sulfotransferases; Heparitina sulfato; Linhagem celular; Neoplasias colorretais; Neoplasias da próstata; Heparitin sulfate; Cell line; Colorectal neoplasms; Prostatic neoplasms

6-O-endossulfatases 1 e 2 (SULFs) sao enzimas extracelulares que removem grupos 6-O-sulfato do heparam sulfato (HS) na superficie celular, modulando, desta forma, suas atividades biologicas. Estudos recentes revelaram que diversos tipos de tumores apresentam diferencas na expressao de SULFs, entre eles: carcinoma hepatocelular, de pancreas, carcinoma de celulas escamosas de cabeca e pescoco, cancer gastrico, adenocarcinoma de pulmao e carcinoma de celulas escamosas de pulmao. Contudo, a literatura mostra-se ambigua com relacao a funcao das SULFs no cancer, sendo estas relatadas tanto como anti-, quanto como pro-tumorigenicas. Este trabalho teve como objetivo principal o estudo das consequencias funcionais causadas pela superexpressao de SULFs em linhagens celulares de canceres colorretal e de prostata humanos. Celulas de cancer colorretal Caco-2 e HCT-116 foram transfectadas com o plasmideo de expressao pcDNA 3.1 contendo o cDNA de SULF1 ou SULF2; e a linhagem epitelial normal de prostata RWPE-1 e as linhagens de cancer de prostata PC3 e DU-145 foram transfectadas com SULF2. Posteriormente, as celulas transfectadas foram selecionadas clonalmente quanto a expressao de SULFs e submetidas a ensaios de viabilidade, proliferacao, migracao, adesao, formacao de colonias, entre outros. A superexpressao de SULFs resultou em um aumento da viabilidade e da migracao celular em todas as linhagens de cancer estudadas. Esses efeitos foram revertidos atraves do knockdown das enzimas utilizando iRNA especificos. Alem disso, o aumento de SULF1 e 2 nas linhagens de cancer colorretal resultaram em aumento na adesao dessas a fibronectina, colageno I e laminina. Observamos ainda um aumento no potencial de migracao, atraves de membranas com poros de 8 m, das celulas de cancer colorretal e de prostata, bem como a formacao de colonias tumorais maiores, in vitro. Finalmente, a superexpressao de SULFs resultou em uma diminuicao do dissacarideo trissulfatado UA(2S)-GlcNS(6S) no HS das celulas analisadas. Esta modificacao na estrutura do HS ocasionou alteracoes nas vias de sinalizacao das linhagens de cancer colorretal Caco-2 e HCT-116, com um aumento na via de sinalizacao de Wnt e acumulo de beta-catenina. Ja as linhagens de cancer de prostata PC3 e DU-145 apresentaram um aumento de marcadores de transicao epitelio-mesenquimal, indicando uma maior desdiferenciacao celular. Portanto, os parametros celulares analisados in vitro indicaram um aumento das caracteristicas tumorais nas linhagens estudadas. Reunidos, nossos resultados evidenciaram um possivel efeito pro-tumorigenico das SULFs nos canceres colorretal e de prostata, e sugerem um importante papel das enzimas para a progressao destas doencas