Estudo da homeostase lisossômica e caracterização de fibroblastos de pacientes com doença de Fabry em cultura celular

• Autor(a) principal: Gomez, Nadia Aylin [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5074612; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50428
• topic: Doença de Fabry; Genética; Doenças por armazenamento dos lisossomos; Serina-treonina quinases TOR; Fabry Disease; Lysosomal Storage Disorder; Lysosomal Homeostasis; Lysosomal Calcium; Mtorc1

A doença de Fabry é uma das poucas doenças de depósito lisossômico que possui herança recessiva ligada ao cromossomo X. Uma mutação no gene GLA, gera uma deficiência da enzima alfa-Galactosidase A (α-Gal A), que junto com o acúmulo crescente de globotriaosilceramida (Gb3) resultam nos sinais e sintomas. Esta é uma doença crônica e as células do endotélio vascular são as mais comprometidas, levando a um comprometimento multiorgânico com algumas ocorrências neurológicas que podem causar uma morte prematura. Os lisossomos são as principais organelas citosólicas afetadas na doença de Fabry. O funcionamento normal destas organelas é necessário para vários processos vitais. Eles estão envolvidos na autofagia, endocitose, exocitose e fagocitose entre outras funções. A regulação da homeostase lisossômica é muito importante e, recentemente, se demonstrou que a sinalização lisossomo-núcleo participa desta regulação. Ainda não é totalmente conhecido o impacto da deficiência enzimática nos lisossomos de pacientes com doença de Fabry. Por esse motivo, o objetivo de nosso estudo foi avaliar as concentrações de Ca2+, mTOR e TFEB, os principais protagonistas da maquinaria que regula a autofagia e a biogênese lisossômica, em fibroblastos de pacientes com doença de Fabry. Neste trabalho caracterizamos fibroblastos de pacientes com doença de Fabry, observando a deficiência de α-Gal A e o acúmulo de Gb3. Além disso foi constatada uma disfunção lisossômica nas atividades enzimáticas de β-Glicosidase, α-Glicosidase ácida, α-L-Iduronidase. Os parâmetros bioquímicos, que participam da regulação da homeostase lisossômica e o pH citoplasmático foram avaliados, mas não mostraram diferenças significativas, o que sugere que as células mantêm a regulação lisossômica em equilíbrio e também a homeostase celular. Por outro lado, foi verificado que o Ca2+citoplasmático (Ca2+cit) e o Ca2+ do retículo endoplasmático (Ca2+ret), em culturas celulares de pacientes homens e mulheres, estão modificados. Isto sugere alterações em mecanismos dependentes deste íon. Concluindo, os fibroblastos de pacientes com doença de Fabry apresentam uma alteração das enzimas lisossômicas avaliadas, assim como do Ca2+cit e do Ca2+ret o que, por sua vez, não afetou a regulação dos parâmetros da homeostase lisossômica, como pode ser verificado mediante a análise de Ca2+lis, p-mTOR e TFEB, ou ainda, pelo equilíbrio celular avaliado por meio do pHcit.