Influência da deficiência de melatonina sobre a expressão de microRNAs em cérebro e espermatozoides de ratos

• Autor(a) principal: Morante, Ingrid Marques [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/68732
• topic: Herança epigenética; Melatonina; MicroRNAs; Melatonin; Epigenetic inheritance; MicroRNAs

A melatonina é uma molécula ubíqua na natureza, produzida majoritariamente na glândula pineal, uma glândula neuroendócrina localizada entre os dois hemisférios cerebrais e constituída principalmente por astrócitos e pinealócitos. Embora erroneamente conhecida como “hormônio do sono”, a melatonina tem por papel a sinalização ao organismo acerca da chegada da noite, coordenando alterações metabólicas relacionadas ao ciclo circadiano. Além da ritmicidade, a melatonina também possui propriedades neuroprotetoras, imunomodulatórias, antiinflamatórias, antitumorais, antioxidantes e atua na maturação de gametas, de forma a garantir o desenvolvimento adequado especialmente dos espermatozoides, por meio da proteção contra o estresse oxidativo. A melatonina parece ser capaz de interagir com miRNAs, pequenas moléculas não-codificantes que atuam na modulação da expressão gênica de forma pós-transcricional. O padrão de expressão de miRNAs pode ser transmitido à prole por meio da herança epigenética. Considerando a provável interação da melatonina com diversos miRNAs e seu papel na maturação de gametas, é de suma importância investigar se a alteração de sua síntese poderia ser capaz de influenciar a expressão de miRNAs tanto no cérebro como nos espermatozoides. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo analisar o perfil de expressão de microRNAs relacionados ao neurodesenvolvimento em espermatozoides e tecido cerebral de ratos controle, PINX (pinelectomizados) e PINX-MEL (pinealectomizados que passaram por reposição oral de melatonina) a partir do método de RT-qPCR. A extração de RNA e enriquecimento de miRNAs foi realizada por meio do kit mirVana® miRNA Isolation (ThermoFisher®). A qPCR foi realizada utilizando ensaios TaqMan Fast Advanced® Assays e pela utilização da plataforma Roche LightCycler 96. Os resultados obtidos foram avaliados estatisticamente pelo método de Wilcoxon. A análise da qualidade do RNA extraído indicou que a metodologia aplicada aos espermatozoides precisa ser adaptada, de forma que não foi possível realizar a qPCR para essas células. A análise da expressão de miRNAs no cérebro não revelou diferenças estatisticamente significantes (p>0,05) entre os três grupos avaliados. Isso possivelmente se deve à variabilidade interamostral apresentada. Assim, o aumento do número amostral é necessário para que seja possível inferir sobre a relação da melatonina com a expressão desses miRNAs