Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano.
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2008 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM |
Texto Completo: | http://localhost:8080/tede/handle/tede/41 |
Resumo: | A enzima conversora de angiotensina I (ECA) - (EC.3.4.15.1) é uma metaloproteinase com dois domínios homólogos ativos amino e carbóxi-terminal. A enzima está envolvida na conversão de Angiotensina I em Angiotensina II e na inativação da bradicinina in vivo. Por isso é uma importante reguladora da pressão sanguínea e da homeostase eletrolítica e fluídica. A ECA se encontra em diversos tecidos e líquidos biológicos e pode atuar sobre substratos diferentes em cada local. In vitro, sabe-se que a ECA hidrolisa vários outros peptídeos, tais como substância P, N-acetil-seril-aspartil-lisil-prolina (Ac-SDKP), hormônio liberador do hormônio luteinizante (LH-RH) e neurotensina. Além disso, hidrolisa a colescistocinina-8 e análogos da gastrina. Existem duas formas de ECA, sendo uma de membrana e outra secretória. Entre as formas secretórias a ECA testicular apresenta apenas o C-domínio. O íleo é o local de síntese de hormônios gastrointestinais que afetam a motilidade do intestino delgado. Nele se encontra a neurotensina e a substância P que são hidrolisados in vitro pela ECA. De posse de substratos com supressão intramolecular de fluorescência que são hidrolisados por ambos os domínios catalíticos da enzima e que distinguem as atividades dos domínios C e N, e dos dados da literatura nos propusemos a caracterizar a(s) enzima(s) com atividade conversora de angiotensina no fluido ileal humano. Foram purificadas duas formas de ECA que apresentam atividade sobre os substratos: Hippuryl-His-Leu e Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH, sendo que esta atividade enzimática foi inibida com captopril numa concentração final na cubeta de 1 x 10-2 μM. A maior parte da atividade enzimática mostrou uma massa molecular aparente em torno de 108 kDa sendo predominantemente a atividade para N-domínio. Outra forma de massa molecular em torno de 55 kDa mostrou atividade principalmente para C-domínio. Essa fração de 55 kDa foi testada quanto à sua capacidade de hidrólise sobre a angiotensina I, a bradicinina, a neurotensina e a substância P. A hidrólise foi verificada através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em coluna de octadecilsilano, dos produtos gerados após a incubação com a enzima purificada. Essa isoforma de 55 kDa apresentou pH ótimo para o substrato Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH em pH 7 e para o substrato Abz-Leu-Phe-Lys(Dnp)-OH em torno do pH 6. O perfil de pH ótimo para o Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH, é muito semelhante aos dados da literatura para outras formas de enzima conversora de angiotensina. Os parâmetros cinéticos determinados para o substrato Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH foi de Km = 1,95 YM; Kcat = 154,5 s-1 e Kcat/Km =79,23 YM-1s-1e para o substrato Abz-Leu-Phe-Lys(Dnp)-OH os valores foram de Km = 3,64 YM; Kcat = 854 s-1 e Kcat/Km = 234,61 YM-1s-1. Uma isoforma N-domínio já foi descrita no fluido ileal humano, esse trabalho mostra que o fluido ileal contém uma isoforma com características C-domínio. O papel fisiológico da ECA no fluido ileal ainda não está esclarecido. Entretanto a presença simultânea de peptídeos tais como substância P, angiotensina II e neurotensina no intestino relacionados com a ação da enzima conversora sugere um papel fisiológico local para essa enzima. O isolamento e a caracterização de uma isoforma com atividade predominantemente de C-domínio no fluido ileal humano está sendo descrita pela primeira vez nesse trabalho. |
id |
UFTM_195d5d005de41c96388b93532b35fecc |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:bdtd.uftm.edu.br:tede/41 |
network_acronym_str |
UFTM |
network_name_str |
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM |
repository_id_str |
|
spelling |
Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano.Enzima conversora de angiotensinaECAFluido ileal humano, angiotensina I.CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA::ANATOMIA PATOLOGICA E PATOLOGIA CLINICAA enzima conversora de angiotensina I (ECA) - (EC.3.4.15.1) é uma metaloproteinase com dois domínios homólogos ativos amino e carbóxi-terminal. A enzima está envolvida na conversão de Angiotensina I em Angiotensina II e na inativação da bradicinina in vivo. Por isso é uma importante reguladora da pressão sanguínea e da homeostase eletrolítica e fluídica. A ECA se encontra em diversos tecidos e líquidos biológicos e pode atuar sobre substratos diferentes em cada local. In vitro, sabe-se que a ECA hidrolisa vários outros peptídeos, tais como substância P, N-acetil-seril-aspartil-lisil-prolina (Ac-SDKP), hormônio liberador do hormônio luteinizante (LH-RH) e neurotensina. Além disso, hidrolisa a colescistocinina-8 e análogos da gastrina. Existem duas formas de ECA, sendo uma de membrana e outra secretória. Entre as formas secretórias a ECA testicular apresenta apenas o C-domínio. O íleo é o local de síntese de hormônios gastrointestinais que afetam a motilidade do intestino delgado. Nele se encontra a neurotensina e a substância P que são hidrolisados in vitro pela ECA. De posse de substratos com supressão intramolecular de fluorescência que são hidrolisados por ambos os domínios catalíticos da enzima e que distinguem as atividades dos domínios C e N, e dos dados da literatura nos propusemos a caracterizar a(s) enzima(s) com atividade conversora de angiotensina no fluido ileal humano. Foram purificadas duas formas de ECA que apresentam atividade sobre os substratos: Hippuryl-His-Leu e Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH, sendo que esta atividade enzimática foi inibida com captopril numa concentração final na cubeta de 1 x 10-2 μM. A maior parte da atividade enzimática mostrou uma massa molecular aparente em torno de 108 kDa sendo predominantemente a atividade para N-domínio. Outra forma de massa molecular em torno de 55 kDa mostrou atividade principalmente para C-domínio. Essa fração de 55 kDa foi testada quanto à sua capacidade de hidrólise sobre a angiotensina I, a bradicinina, a neurotensina e a substância P. A hidrólise foi verificada através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em coluna de octadecilsilano, dos produtos gerados após a incubação com a enzima purificada. Essa isoforma de 55 kDa apresentou pH ótimo para o substrato Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH em pH 7 e para o substrato Abz-Leu-Phe-Lys(Dnp)-OH em torno do pH 6. O perfil de pH ótimo para o Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH, é muito semelhante aos dados da literatura para outras formas de enzima conversora de angiotensina. Os parâmetros cinéticos determinados para o substrato Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH foi de Km = 1,95 YM; Kcat = 154,5 s-1 e Kcat/Km =79,23 YM-1s-1e para o substrato Abz-Leu-Phe-Lys(Dnp)-OH os valores foram de Km = 3,64 YM; Kcat = 854 s-1 e Kcat/Km = 234,61 YM-1s-1. Uma isoforma N-domínio já foi descrita no fluido ileal humano, esse trabalho mostra que o fluido ileal contém uma isoforma com características C-domínio. O papel fisiológico da ECA no fluido ileal ainda não está esclarecido. Entretanto a presença simultânea de peptídeos tais como substância P, angiotensina II e neurotensina no intestino relacionados com a ação da enzima conversora sugere um papel fisiológico local para essa enzima. O isolamento e a caracterização de uma isoforma com atividade predominantemente de C-domínio no fluido ileal humano está sendo descrita pela primeira vez nesse trabalho.Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas GeraisUniversidade Federal do Triângulo MineiroPatologia ClínicaBRUFTMPrograma de Pós-Graduação em PatologiaGomes, Roseli Aparecida da SilvaCPF:44940874672http://lattes.cnpq.br/6327703613785635Rocha, Mariana Lima Prata2015-11-27T18:50:17Z2009-02-132008-07-01info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfapplication/pdfROCHA, Mariana Lima Prata. Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano.. 2008. 80 f. Dissertação (Mestrado em Patologia Clínica) - Universidade Federal do Triângulo Mineiro, Uberaba, 2008.http://localhost:8080/tede/handle/tede/41porinfo:eu-repo/semantics/embargoedAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTMinstname:Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM)instacron:UFTM2019-06-26T19:52:51Zoai:bdtd.uftm.edu.br:tede/41Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://bdtd.uftm.edu.br/PUBhttp://bdtd.uftm.edu.br/oai/requestbdtd@uftm.edu.br||bdtd@uftm.edu.bropendoar:2019-06-26T19:52:51Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM - Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM)false |
dc.title.none.fl_str_mv |
Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano. |
title |
Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano. |
spellingShingle |
Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano. Rocha, Mariana Lima Prata Enzima conversora de angiotensina ECA Fluido ileal humano, angiotensina I. CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA::ANATOMIA PATOLOGICA E PATOLOGIA CLINICA |
title_short |
Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano. |
title_full |
Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano. |
title_fullStr |
Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano. |
title_full_unstemmed |
Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano. |
title_sort |
Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano. |
author |
Rocha, Mariana Lima Prata |
author_facet |
Rocha, Mariana Lima Prata |
author_role |
author |
dc.contributor.none.fl_str_mv |
Gomes, Roseli Aparecida da Silva CPF:44940874672 http://lattes.cnpq.br/6327703613785635 |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Rocha, Mariana Lima Prata |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Enzima conversora de angiotensina ECA Fluido ileal humano, angiotensina I. CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA::ANATOMIA PATOLOGICA E PATOLOGIA CLINICA |
topic |
Enzima conversora de angiotensina ECA Fluido ileal humano, angiotensina I. CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA::ANATOMIA PATOLOGICA E PATOLOGIA CLINICA |
description |
A enzima conversora de angiotensina I (ECA) - (EC.3.4.15.1) é uma metaloproteinase com dois domínios homólogos ativos amino e carbóxi-terminal. A enzima está envolvida na conversão de Angiotensina I em Angiotensina II e na inativação da bradicinina in vivo. Por isso é uma importante reguladora da pressão sanguínea e da homeostase eletrolítica e fluídica. A ECA se encontra em diversos tecidos e líquidos biológicos e pode atuar sobre substratos diferentes em cada local. In vitro, sabe-se que a ECA hidrolisa vários outros peptídeos, tais como substância P, N-acetil-seril-aspartil-lisil-prolina (Ac-SDKP), hormônio liberador do hormônio luteinizante (LH-RH) e neurotensina. Além disso, hidrolisa a colescistocinina-8 e análogos da gastrina. Existem duas formas de ECA, sendo uma de membrana e outra secretória. Entre as formas secretórias a ECA testicular apresenta apenas o C-domínio. O íleo é o local de síntese de hormônios gastrointestinais que afetam a motilidade do intestino delgado. Nele se encontra a neurotensina e a substância P que são hidrolisados in vitro pela ECA. De posse de substratos com supressão intramolecular de fluorescência que são hidrolisados por ambos os domínios catalíticos da enzima e que distinguem as atividades dos domínios C e N, e dos dados da literatura nos propusemos a caracterizar a(s) enzima(s) com atividade conversora de angiotensina no fluido ileal humano. Foram purificadas duas formas de ECA que apresentam atividade sobre os substratos: Hippuryl-His-Leu e Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH, sendo que esta atividade enzimática foi inibida com captopril numa concentração final na cubeta de 1 x 10-2 μM. A maior parte da atividade enzimática mostrou uma massa molecular aparente em torno de 108 kDa sendo predominantemente a atividade para N-domínio. Outra forma de massa molecular em torno de 55 kDa mostrou atividade principalmente para C-domínio. Essa fração de 55 kDa foi testada quanto à sua capacidade de hidrólise sobre a angiotensina I, a bradicinina, a neurotensina e a substância P. A hidrólise foi verificada através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em coluna de octadecilsilano, dos produtos gerados após a incubação com a enzima purificada. Essa isoforma de 55 kDa apresentou pH ótimo para o substrato Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH em pH 7 e para o substrato Abz-Leu-Phe-Lys(Dnp)-OH em torno do pH 6. O perfil de pH ótimo para o Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH, é muito semelhante aos dados da literatura para outras formas de enzima conversora de angiotensina. Os parâmetros cinéticos determinados para o substrato Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)P-OH foi de Km = 1,95 YM; Kcat = 154,5 s-1 e Kcat/Km =79,23 YM-1s-1e para o substrato Abz-Leu-Phe-Lys(Dnp)-OH os valores foram de Km = 3,64 YM; Kcat = 854 s-1 e Kcat/Km = 234,61 YM-1s-1. Uma isoforma N-domínio já foi descrita no fluido ileal humano, esse trabalho mostra que o fluido ileal contém uma isoforma com características C-domínio. O papel fisiológico da ECA no fluido ileal ainda não está esclarecido. Entretanto a presença simultânea de peptídeos tais como substância P, angiotensina II e neurotensina no intestino relacionados com a ação da enzima conversora sugere um papel fisiológico local para essa enzima. O isolamento e a caracterização de uma isoforma com atividade predominantemente de C-domínio no fluido ileal humano está sendo descrita pela primeira vez nesse trabalho. |
publishDate |
2008 |
dc.date.none.fl_str_mv |
2008-07-01 2009-02-13 2015-11-27T18:50:17Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/masterThesis |
format |
masterThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
ROCHA, Mariana Lima Prata. Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano.. 2008. 80 f. Dissertação (Mestrado em Patologia Clínica) - Universidade Federal do Triângulo Mineiro, Uberaba, 2008. http://localhost:8080/tede/handle/tede/41 |
identifier_str_mv |
ROCHA, Mariana Lima Prata. Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano.. 2008. 80 f. Dissertação (Mestrado em Patologia Clínica) - Universidade Federal do Triângulo Mineiro, Uberaba, 2008. |
url |
http://localhost:8080/tede/handle/tede/41 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
eu_rights_str_mv |
embargoedAccess |
dc.format.none.fl_str_mv |
application/pdf application/pdf |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal do Triângulo Mineiro Patologia Clínica BR UFTM Programa de Pós-Graduação em Patologia |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal do Triângulo Mineiro Patologia Clínica BR UFTM Programa de Pós-Graduação em Patologia |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM instname:Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM) instacron:UFTM |
instname_str |
Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM) |
instacron_str |
UFTM |
institution |
UFTM |
reponame_str |
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM |
collection |
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM |
repository.name.fl_str_mv |
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM - Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM) |
repository.mail.fl_str_mv |
bdtd@uftm.edu.br||bdtd@uftm.edu.br |
_version_ |
1813013339065810944 |