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Potencial terapêutico do transplante xenogênico de células mesenquimais estromais na Doença Inflamatória Intestinal.Therapeutic potential of xenogenic mesenchymal stromal cells transplantation in inflammatory bowel disease.Doença inflamatória intestinalCélulas mesenquimais estromaisResposta InflamatóriaTerapia celularInflammatory bowel diseaseMesenchymal stromal cellsInflammatory responseCell therapyCNPQ::CIENCIAS DA SAUDEAs Doenças Inflamatórias Intestinais (DII), como a doença de Crohn e a colite ulcerativa, são caracterizadas por inflamação crônica descontrolada da mucosa intestinal. Enquanto a colite ulcerativa apresenta-se com resposta Th2, pacientes com doença de Crohn apresentam resposta Th1 e, recentemente, descobriu-se a presença de células Th17 na mucosa inflamada, além de falhas no processo de imunorregulação, por células T reguladoras (Tregs). Embora as terapias atuais sejam direcionadas a estes elementos da cascata imuno-inflamatória, nenhum tratamento é, no momento, totalmente efetivo, sendo evidente a necessidade de novas terapias para o controle da progressão das DII. As células mesenquimais estromais (MSCs) são células multipotentes com grande capacidade imunossupressora e reguladora, com importantes perspectivas terapêuticas para o tratamento de doenças autoimunes e inflamatórias. Sendo assim, este estudo pré-clínico avaliou o potencial terapêutico de MSCs humanas na DII induzida experimentalmente. As MSCs foram isoladas, cultivadas e caracterizadas a partir de tecido adiposo de doadores saudáveis (adMSC). A DII foi induzida em camundongos BALB/c com injeção intrarretal de ácido trinitrobenzeno sulfônico (TNBS) e, após indução da doença, os animais foram tratados com MSC e eutanasiados nos dias 3, 7, 14 e 60 pós-transplante, para a coleta de segmentos intestinais, baço e linfonodos mesentéricos. Foram avaliados o peso, presença de diarréia, mortalidade e, por histopatologia, a resposta inflamatória intestinal de camundongos com DII antes e após o tratamento com MSC. A modulação da resposta imune intestinal foi averiguada com ênfase nas subpopulações de células Tregs e Th17. Além destas, as células do infiltrado inflamatório no intestino, baço e linfonodos foram quantificadas por citometria de fluxo. As citocinas na mucosa intestinal foram avaliadas por Cytometric Bead Array (CBA) e ELISA. Amostras de outros órgãos foram também coletadas com o intuito de se averiguar possíveis alterações histopatológicas pós-infusão de MSC, o que não foi detectado. Os resultados demonstraram que as adMSCs apresentaram marcadores de superfície, plasticidade e potencial supressor semelhante aos dados já descrito para MSCs. Houve controle aparente da inflamação intestinal pós-tratamento com MSC, com redução dos sinais clínicos da DII experimental. O infiltrado inflamatório na DII foi influenciado pelo tratamento com adMSC, com alterações específicas nas populações de neutrófilos, eosinófilos, macrófagos, células dendríticas, células NK, NKT e linfócitos T. O tratamento com adMSC induziu inversão do padrão de resposta imune intestinal, com aumento de regulação (Tregs) e resposta Th2 e redução de citocinas inflamatórias além da diminuição da população de células Th17. Finalmente, nossos resultados contribuíram para o entendimento da patogênese da DII no modelo de colite induzida por TNBS, da ação das MSC e de sua eficácia no tratamento dessas doenças, podendo ser uma nova estratégia terapêutica para o tratamento da colite ulcerativa e/ou doença de Crohn.Inflammatory Bowel Diseases (IBD) such as Crohn's disease and ulcerative colitis, are characterized by uncontrolled chronic inflammation of the intestinal mucosa. While ulcerative colitis is characterized by Th2 immune response, patients with Crohn s disease show Th1 reactions. The newly discovered Th17 responses are also involved in IBD pathogenesis, along with a lack or absence of regulation by regulatory T cells (Tregs) in inflamed mucosa. Although current therapies are directed at the immuno-inflammatory responses, no treatment is fully effective and it is evident that novel therapies are still needed for controlling IBD progression. Mesenchymal stromal cells (MSCs) are multipotent cells with regulatory immunosuppressive activities, thus becoming an important therapeutic tool for the treatment of autoimmune and inflammatory diseases. Therefore, this preclinical study evaluated the therapeutic potential of human MSCs in experimentally induced IBD. The MSCs were isolated, cultured and characterized from adipose tissue of healthy donors (adMSC). IBD was induced in BALB/c mice injected with trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) by intraretal route. After that, mice were treated with MSC and euthanized on days 3, 7, 14 and 60 post-transplant for the collection of intestinal segments, spleen and mesenteric lymph nodes. We evaluated the weight, presence of diarrhea, mortality, and by histopathology, the intestinal inflammatory response of mice with IBD in the presence or absence of treatment with MSC. The modulation of the intestinal immune response was evaluated with emphasis on the subpopulations of Tregs and Th17 cells. Additionally, the inflammatory cells in the intestine, spleen and lymph nodes were evaluated by flow cytometry. The colon cytokines were measured by Cytometric Bead Array (CBA) and ELISA. Samples of organs other than large gut were also collected in order to verify the possible pathological changes (not found) induced after MSCs transplantation. Results demonstrated that the adMSCs showed surface markers, plasticity and suppressor potential similar to other MSCs previously described. The intestinal inflammation was apparently controlled after MSC treatment, with reduced clinical signs of the experimentally induced IBD. The inflammatory infiltrate in IBD was influenced by treatment with adMSC, as demonstrated by changes in the population of neutrophils, eosinophils, macrophages, dendritic cells, NK/NKT cells and T lymphocytes. Moreover, treatment with adMSC induced an inversion of the pattern of inflamed gut immune response, with increased Tregs and Th2 responses along with a reduction in inflammatory cytokines and Th17 cells. Finally, our results contributed to the understanding of the pathogenesis of IBD in the TNBS-colitis model, to the adMSC activities and effectiveness in the treatment of these diseases and pointed to adMSC as novel therapeutic strategy for the treatment of ulcerative colitis and/ or Crohn's disease.Universidade Federal do Triângulo MineiroBioquímica, Fisiologia e FarmacologiaBRUFTMCurso de Pós-Graduação em Ciências FisiológicasCardoso, Cristina Ribeiro de BarrosCPF:03416215605http://lattes.cnpq.br/0899048830187429Alves, Vanessa Beatriz Freitas2015-11-27T18:51:06Z2012-09-212011-07-19info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfapplication/pdfALVES, Vanessa Beatriz Freitas. Therapeutic potential of xenogenic mesenchymal stromal cells transplantation in inflammatory bowel disease.. 2011. 136 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica, Fisiologia e Farmacologia) - Universidade Federal do Triângulo Mineiro, Uberaba, 2011.http://localhost:8080/tede/handle/tede/63porinfo:eu-repo/semantics/embargoedAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTMinstname:Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM)instacron:UFTM2019-06-26T20:04:00Zoai:bdtd.uftm.edu.br:tede/63Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://bdtd.uftm.edu.br/PUBhttp://bdtd.uftm.edu.br/oai/requestbdtd@uftm.edu.br||bdtd@uftm.edu.bropendoar:2024-04-24T09:59:24.927143Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM - Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM)false
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