Células tronco cardíacas na hipertensão arterial espontânea em ratos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: RIBEIRO, Patricia de Carvalho
Data de Publicação: 2016
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM
Texto Completo: http://bdtd.uftm.edu.br/handle/123456789/1361
Resumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar o número de células tronco cardíacas c-Kit+-CD45neg e Sca-1+-CD45neg, por meio de citometria de fluxo, e células tronco mesenquimais cardíacas, por meio do ensaio de unidades formadoras de colônias semelhantes a fibroblastos (“Colony Forming Unit-Fibroblasts”-CFU-F), no coração de ratos espontaneamente hipertensos (SHR), comparando com ratos normotensos (WKY). Para tal, ratos SHR e WKY jovens (de 4 semanas de idade) e adultos (de 14 e 30 semanas de idade) foram avaliados tendo seus corações removidos após eutanásia para extração de células tronco via fragmentação mecânica, digestão enzimática (com colagenase tipo I ou Tripsina-EDTA) e filtração diferencial (em 40µm ou 70µm). A suspensão de células cardíacas resultante foi então analisada por citometria de fluxo, a fim de quantificar o número de células tronco cardíacas c-Kit+-CD45neg e Sca-1+-CD45neg ou semeadas em baixa densidade em placas de cultura, a fim de quantificar o número de CFU-Fs, as quais se originam clonalmente de células tronco mesenquimais cardíacas individuais. Os animais SHR apresentaram-se hipertensos e com hipertrofia cardíaca a partir da 14ª semana de idade. A quantidade das células tronco cardíacas c-Kit+-CD45neg no coração de SHR foi maior na 4ª semana de idade (0,74±0,09% versus 0,46±0,09% nos ratos WKY, p<0,05) e menor entre a 14ª e 30ª semana de idade (0,43±0,10% versus 0,78±0,12% em WKY, p<0,05). O número de células tronco cardíacas Sca-1+-CD45neg e de células tronco mesenquimais cardíacas, contadas como CFU-Fs/200.000 células cultivadas, não foi diferente entre as duas linhagens de animais em qualquer das idades estudadas. O menor número de células tronco c-Kit+-CD45neg no coração de SHRs observado na fase estabelecida da hipertensão arterial (14-30 semanas), com hipertrofia cardíaca vigente, sugere que a redução numérica possa ser uma consequência do processo hipertensivo e hipertrófico cardíaco. Dada a importância funcional das células c-Kit+-CD45neg na homeostase do tecido cardíaco, a redução numérica destas células na fase hipertensiva sugere que as mesmas podem ter alguma implicação na patogênese da hipertrofia cardíaca associada à hipertensão arterial. Estudos adicionais fazem–se necessários para estabelecer um real papel destas células tronco no contexto da hipertensão arterial sistêmica e hipertrofia cardíaca.
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A suspensão de células cardíacas resultante foi então analisada por citometria de fluxo, a fim de quantificar o número de células tronco cardíacas c-Kit+-CD45neg e Sca-1+-CD45neg ou semeadas em baixa densidade em placas de cultura, a fim de quantificar o número de CFU-Fs, as quais se originam clonalmente de células tronco mesenquimais cardíacas individuais. Os animais SHR apresentaram-se hipertensos e com hipertrofia cardíaca a partir da 14ª semana de idade. A quantidade das células tronco cardíacas c-Kit+-CD45neg no coração de SHR foi maior na 4ª semana de idade (0,74±0,09% versus 0,46±0,09% nos ratos WKY, p<0,05) e menor entre a 14ª e 30ª semana de idade (0,43±0,10% versus 0,78±0,12% em WKY, p<0,05). O número de células tronco cardíacas Sca-1+-CD45neg e de células tronco mesenquimais cardíacas, contadas como CFU-Fs/200.000 células cultivadas, não foi diferente entre as duas linhagens de animais em qualquer das idades estudadas. O menor número de células tronco c-Kit+-CD45neg no coração de SHRs observado na fase estabelecida da hipertensão arterial (14-30 semanas), com hipertrofia cardíaca vigente, sugere que a redução numérica possa ser uma consequência do processo hipertensivo e hipertrófico cardíaco. Dada a importância funcional das células c-Kit+-CD45neg na homeostase do tecido cardíaco, a redução numérica destas células na fase hipertensiva sugere que as mesmas podem ter alguma implicação na patogênese da hipertrofia cardíaca associada à hipertensão arterial. Estudos adicionais fazem–se necessários para estabelecer um real papel destas células tronco no contexto da hipertensão arterial sistêmica e hipertrofia cardíaca.The aim of this study was to evaluate in the heart of spontaneously hypertensive rats (SHR) compared to normotensive rats (WKY) the number of cardiac stem cells cKit+-CD45neg and Sca-1+-CD45neg, by flow cytometry, and the number of cardiac mesenchymal stem cells through the Colony Forming Unit-fibroblasts (CFU-F) assay. Therefore, young (4 weeks old) and adult (14 to 30 weeks old) SHRs and WKY rats had their hearts removed after euthanasia for the extraction of stem cells via mechanical fragmentation, enzymatic digestion (collagenase type I or trypsin-EDTA) and differential filtration (at 40µm or 70µm). The resulting suspension of cardiac cells was then analyzed by flow cytometry, in order to quantify the number of cardiac stem cells c-Kit+-CD45neg and Sca-1+-CD45neg, or seeded at low density in culture plates, in order to quantify the number of CFU-Fs, which clonally originate from individuals cardiac mesenchymal stem cells. The SHRs were hypertensive and exhibited cardiac hypertrophy after the 14th week of age. The number of c-Kit+-CD45neg cardiac stem cells in the heart of SHRs was higher at 4 weeks of age (0.74 ± 0.09% versus 0.46 ± 0.09% in WKY rats, p <0.05) and lower between the 14th and 30th week of age (0.43 ± 0.10% versus 0.78 ± 0.12% in WKY rats, p <0.05). The number of Sca-1+-CD45neg cardiac stem cells and the number of cardiac mesenchymal stem cells, counted as CFU-Fs / 200,000 plated cells were not different between the two strains of animals at any age studied. The lower number of c-Kit+- CD45neg cardiac stem cells in the heart of SHRs in the established phase of hypertension (14-30 weeks), with ongoing cardiac hypertrophy, suggests that this numerical reduction may be a consequence of hypertension and cardiac hypertrophic process. Given the functional significance of c-Kit+-CD45neg cells in the homeostasis of heart tissue, the reduced number of these cells in hypertensive phase suggests that they may have some implication in the pathogenesis of cardiac hypertrophy associated with hypertension. Additional studies are required in order to establish a real role of these stem cells in the context of hypertension and cardiac hypertrophy.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESUniversidade Federal do Triângulo MineiroInstituto de Ciências da Saúde - ICS::Curso de MedicinaBrasilUFTMPrograma de Pós-Graduação em Ciências FisiológicasSILVA, Valdo Jose Dias da64003051653http://lattes.cnpq.br/4763314549493316RIBEIRO, Patricia de Carvalho2022-08-02T17:44:38Z2016-06-102022-08-02T17:44:38Z2016-06-10info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://bdtd.uftm.edu.br/handle/123456789/1361porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTMinstname:Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM)instacron:UFTM2022-08-10T14:23:30Zoai:bdtd.uftm.edu.br:123456789/1361Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://bdtd.uftm.edu.br/PUBhttp://bdtd.uftm.edu.br/oai/requestbdtd@uftm.edu.br||bdtd@uftm.edu.bropendoar:2022-08-10T14:23:30Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM - Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM)false
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