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Avaliação do perfil de citocinas em culturas celulares derivadas de pólipos nasais eosinofílicos (antes e após a ação do interferon-α) e pesquisa de células natural killer t invariante (iNKT) em pólipos nasais eosinofílicosEvaluation of the cytokines profile in cellular cultures derived from eosinophilic ethanol polymers (before and after the action of interferon-α) and natural killer t invariant (iNKT) cell research in eosinophilic eosin polymersEvaluación del perfil de citocinas en culturas celulares derivadas de pólipos nasales eosinofílicos (antes y después de la acción del interferon-α) e investigación de células natural killer t invariante (iNKT) en pólipos nasales eosinofílicosPolipose Nasal.Citocina.Interferon -αNasal Polypoid.Cytokine.Interferon -α1Pólipos Nasales.La citocina.Interferones -αImunologia AplicadaIntrodução: a rinossinusite crônica (RSC) é uma doença extremamente complexa e heterogênea caracterizada por inflamação na mucosa nasossinusal por mais de 12 semanas. Mostra-se bastante incidente na população geral e com relevante impacto na qualidade de vida desses pacientes, além de demandar elevados custos relacionados com seu tratamento. Atualmente, a RSC é classificada fenotipicamente em RSC sem pólipos nasais (RSCsPN) e RSC com pólipos nasais (RSCcPN). As bases moleculares e celulares desses dois fenótipos são distintas. Enquanto a RSCsPN caracteriza-se por padrão inflamatório Th1 com predomínio neutrofílico, 80% da RSCcPN, no Ocidente, exibe padrão inflamatório Th2 com predomínio eosinofílico. De acordo com os consensos vigentes, os corticosteroides, os antibióticos e a cirurgia constituem as principais alternativas terapêuticas. Entretanto, não raramente, essas possibilidades de tratamento falham por não atingirem o controle clínico adequado dos pacientes, em especial daqueles que apresentam padrão de citocinas Th2, intenso infiltrado eosinofílico e asma. Os interferons (IFNs) compreendem um conjunto de glicoproteínas que, devido às suas ações imunomoduladora, antiviral e antiproliferativa, são amplamente usadas no tratamento de vasta variedade de doenças crônicas. Também ocupam lugar definido no tratamento de doenças eosinofílicas, tornando-se uma opção em casos de pacientes refratários à corticoterapia ou, conjuntamente a essa, a fim de reduzir a dosagem do corticosteroide. Objetivo: esta pesquisa visa avaliar a ação do IFN-α sobre a produção da citocina Th2 subtipo IL-4, das citocinas Th1 subtipos IFN-γ e IL- 2, das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNF-β e da citocina regulatória IL-10 em culturas celulares de pólipos nasais eosinofílicos, assim como detectar a presença de células iNKT e seus receptores de ativação (NKG2D) e de inibição (KIR) no tecido polipoide nasal. Método: foram realizadas culturas celulares a partir de amostras de tecido polipoide nasal coletadas de 13 pacientes com RSCcPN eosinofílica. Os pólipos foram considerados eosinofílicos segundo o exame histopatológico (>20 eosinófilos/campo de grande aumento). As culturas celulares7 foram estimuladas com 3000 UI de IFN-α. As concentrações do IFN-γ, TNF-α e interleucinas 2, 4, 6 e 10 foram avaliadas, por citometria, no sobrenadante das culturas celulares, antes e após a estimulação com IFN-α. Avaliou-se também, a concentração de células iNKT e seus receptores NKG2D e KIR nas amostras de tecido polipoide nasal eosinofílico. Resultados: entre os pacientes da amostra, 61% eram homens. A média de idade do grupo era 53 anos. 46% dos pacientes eram asmáticos. Os pacientes apresentaram elevados valores para os índices de LundMackay (média igual a 17 para total de 24) e Lund-Kennedy (média igual a 3,69 para total de 4). Houve diminuição significativa da concentração de IL-4 (p = 0,0078), em relação aos controles, 24 horas após a exposição das culturas à ação do IFN-α. Observou-se também que a redução da concentração de IL-4 foi significativamente mais intensa nas culturas avaliadas 24 horas após o estímulo do IFN-α, comparativamente às culturas avaliadas 12 horas após (p = 0,0039). Com relação à IL-6 (p = 0,0186), à IL-10 (p = 0,0039) e ao IFN-γ (p = 0,0039), as culturas celulares dos pólipos nasais eosinofílicos apresentaram, relativamente aos controles, aumento significativo das suas concentrações, 24 horas após à ação do IFN-α. Notou-se também que a elevação da concentração destas citocinas foi significativamente mais relevante nas culturas avaliadas 24 horas após o estímulo do IFN-α, comparativamente às culturas avaliadas 12 horas após (p = 0,0039 para IL-6, p = 0,0091 para IL-10 e p = 0,0269 para IFN-γ). Ao que se refere às interleucinas IL-2 e TNF-α, não houve diferença significativa nas suas concentrações, em relação aos controles, após a estimulação das culturas com o IFN-α. Houve aumento significativo da concentração de células iNKT e seu receptor de ativação NKG2D no tecido polipoide nasal, em relação à mucosa sinusal de pacientes controle. Não houve diferença significativa na concentração do receptor de inibição KIR. Conclusão: a análise dos resultados demonstra que o IFN-α alterou o padrão de citocinas nos sobrenadantes das culturas celulares dos pólipos nasais eosinofílicos. A estimulação das culturas com IFN-α produziu diminuição significativa da concentração da IL-4 (perfil Th2) e aumento significativo da IL-10 (perfil regulatório), do IFN-γ (perfil Th1) e da IL-6 (pró-inflamatória). Estas observações, em conjunto, sugerem que a ação do IFN-α, in vitro, promove um rebalanceamento dos perfis inflamatórios nas culturas celulares dos pólipos nasais eosinofílicos, favorecendo a expressão de citocinas Th1 e regulatórias, em detrimento das citocinas do padrão Th2. Os resultados demonstram também que o tecido polipoide8 nasal eosinofílico apresenta, significativamente, maior população de células iNKT e seu receptor de ativação NKG2D, comparativamente à mucosa sinusal controle.Introduction: Chronic Rhinosinusitis (CRS) is an extremely complex and heterogeneous disease characterized by inflammation in the nasosinusal mucosa for more than 12 weeks. There is a significant incident in the general population and with a significant impact on the quality of life of these patients, in addition to demanding high costs related to their treatment. Currently, CRS is classified phenotypically in CRS without nasal polyps (CRSsNP) and CRS with nasal polyps (CRSsNP). The molecular and cellular bases of these two phenotypes are distinct. While CRSsNP is characterized by a Th1 inflammatory pattern with neutrophilic predominance, 80% of CRSsNP in the West exhibits a Th2 inflammatory pattern with eosinophilic predominance. According to the current consensus, corticosteroids, antibiotics and surgery are the main therapeutic alternatives. However, not infrequently, these treatment possibilities fail because they do not reach adequate clinical control of the patients, especially those with Th2 cytokine pattern, intense eosinophilic infiltrate and asthma. Interferons (IFNs) comprise a set of glycoproteins which, because of their immunomodulatory, antiviral and anti-proliferative actions, are widely used in the treatment of a wide variety of chronic diseases. They also occupy a definite place in the treatment of eosinophilic diseases, becoming an option in patient’s refractory to corticoid therapy or, in conjunction with it, in order to reduce corticosteroid dosage. Objective: This study aims to evaluate the action of IFN-α on the production of cytokine Th2 subtype IL-4, cytokines Th1 subtypes IFN-γ and IL-2, pro-inflammatory cytokines IL-6 and TNF-β and regulatory cytokine IL -10 in cell cultures of eosinophilic nasal polyps, as well as to detect the presence of NKTi cells and their activation (NKG2D) and inhibitory (KIR) receptors in nasal polypoid tissue. Method: Cell cultures were performed from samples of nasal polypoid tissue collected from 13 patients with eosinophilic CRScPN. Polyps were considered eosinophilic according to histopathological examination (> 20 eosinophils / high magnification field). Cell cultures were stimulated with 3000 IU of IFN-α. Concentrations of IFN-γ, TNF-α and10 interleukins 2, 4, 6 and 10 were assessed by cytometry in the supernatant of the cell cultures, before and after IFN-α stimulation. The concentration of NKTi cells and their NKG2D and KIR receptors in the samples of nasal polypoid eosinophilic tissue. Results: Among the patients in the sample, 61% were men. The mean age of the group was 53 years. 46% of the patients were asthmatic. Patients presented high values for the Lund-Mackay indices (mean of 17 for a total of 24) and Lund-Kennedy (mean of 3.69 for a total of 4). There was a significant decrease in IL-4 concentration (p = 0.0078), compared to controls, 24 hours after exposure of the cultures to the action of IFN-α. It was also observed that the reduction of IL-4 concentration was significantly more intense in the cultures evaluated 24 hours after IFN-α stimulation, compared to cultures evaluated 12 hours later (p = 0.0039). With regard to IL-6 (p = 0.0186), IL-10 (p = 0.0039) and IFN-γ (p = 0.0039), cellular cultures of eosinophilic nasal polyps presented, relatively to the controls, a significant increase in their concentrations, 24 hours after the action of IFN-α. It was also noted that the elevation of these cytokines concentration was significantly more relevant in the cultures evaluated 24 hours after IFN-α stimulation, compared to the cultures evaluated 12 hours later (p = 0.0039 for IL-6, p = 0, 0091 for IL-10 and p = 0.0269 for IFN-γ). Concerning interleukins IL-2 and TNF-α, there was no significant difference in their concentrations, in relation to the controls, after the stimulation of cultures with IFN-α. There was a significant increase in the concentration of NKTi cells and their NKG2D activation receptor in the nasal polypoid tissue, in relation to the sinus mucosa of control patients. There was no significant difference in KIR inhibition receptor concentration. Conclusion: Analysis of the results demonstrate that IFN-α altered the cytokine pattern in the supernatants of the cell cultures of the nasal eosinophilic polyps. Stimulation of IFN-α culture produced a significant decrease in IL-4 concentration (Th2 profile) and a significant increase in IL-10 (regulatory profile), IFN- γ (Th1 profile) and IL-6 (pro-inflammatory). These observations, together, suggest that the action of IFN-α, in vitro, promotes a rebalancing of inflammatory profiles in cell cultures of nasal eosinophilic polyps, favoring the expression of Th1 and regulatory cytokines, to the detriment of Th2 cytokines. The results also demonstrate that the eosinophilic nasal polypoid tissue has significantly larger population of NKTi cells and its activation receptor NKG2D, compared to the sinus mucosa control.Introducción: la rinosinusitis crónica (RSC) es una enfermedad extremadamente compleja y heterogénea caracterizada por inflamación en la mucosa nasosinusal por más de 12 semanas. Se muestra bastante incidente en la población general y con relevante impacto en la calidad de vida de estos pacientes, además de demandar elevados costos relacionados con su tratamiento. Actualmente, la RSC se clasifica fenotipicamente en RSC sin pólipos nasales (RSCsPN) y RSC con pólipos nasales (RSCcPN). Las bases moleculares y celulares de estos dos fenotipos son distintas. Mientras que la RSCPN se caracteriza por el patrón inflamatorio Th1 con predominio neutrofílico, el 80% de la RSCcPN, en Occidente, exhibe el patrón inflamatorio Th2 con predominio eosinofílico. De acuerdo con los consensos vigentes, los corticosteroides, los antibióticos y la cirugía constituyen las principales alternativas terapéuticas. Sin embargo, no raramente, estas posibilidades de tratamiento fallan por no alcanzar el control clínico adecuado de los pacientes, en especial de aquellos que presentan patrón de citocinas Th2, intenso infiltrado eosinofílico y asma. Los interferones (IFN) comprenden un conjunto de glicoproteínas que, debido a sus acciones inmunomoduladora, antiviral y antiproliferativa, son ampliamente usadas en el tratamiento de una amplia variedad de enfermedades crónicas. También ocupan lugar definido en el tratamiento de enfermedades eosinofílicas, convirtiéndose en una opción en casos de pacientes refractarios a la corticoterapia o, conjuntamente a esa, a fin de reducir la dosificación del corticoesteroide. Objetivo: Esta investigación pretende evaluar la acción del IFN-α sobre la producción de la citocina Th2 subtipo IL-4, de las citocinas Th1 subtipos IFN-γ e IL-2, de las citocinas pro-inflamatorias IL-6 y TNF-β y de la citocina en los cultivos celulares de pólipos nasales eosinofílicos, así como detectar la presencia de células iNKT y sus receptores de activación (NKG2D) y de inhibición (KIR) en el tejido polipoide nasal. Método: Se realizaron cultivos celulares a partir de muestras de tejido polipoide nasal recogidas de 13 pacientes con RSCcPN eosinofílica. Los pólipos fueron considerados eosinofílicos según el12 examen histopatológico (> 20 eosinófilos / campo de gran aumento). Los cultivos celulares fueron estimulados con 3000 UI de IFN-α. Las concentraciones de IFN-γ, TNF-α e interleucinas 2, 4, 6 y 10 se evaluaron por citometría en el sobrenadante de los cultivos celulares, antes y después de la estimulación con IFN-α. Se evaluó también la concentración de células iNKT y sus receptores NKG2D y KIR en las muestras de tejido polipoide nasal eosinofílico. Resultados: Entre los pacientes de la muestra, el 61% eran hombres. El promedio de edad del grupo era de 53 años. El 46% de los pacientes eran asmáticos. Los pacientes presentaron altos valores para los índices de Lund-Mackay (media igual a 17 para total de 24) y Lund-Kennedy (media igual a 3,69 para total de 4). Se observó una disminución significativa de la concentración de IL-4 (p = 0,0078), en relación a los controles, 24 horas después de la exposición de los cultivos a la acción del IFN-α. Se observó también que la reducción de la concentración de IL-4 fue significativamente más intensa en los cultivos evaluados 24 horas después del estímulo del IFN-α, en comparación con los cultivos evaluados 12 horas después (p = 0,0039). En cuanto a la IL-6 (p = 0,0186), a la IL-10 (p = 0,0039) y al IFN-γ (p = 0,0039), los cultivos celulares de los pólipos nasales eosinofílicos presentaron, aumento significativo de sus concentraciones, 24 horas después de la acción del IFN-α. Se observó también que la elevación de la concentración de estas citocinas fue significativamente más relevante en los cultivos evaluados 24 horas después del estímulo del IFN-α, en comparación con los cultivos evaluados 12 horas después (p = 0,0039 para IL-6, p = 0, 0091 para IL-10 ep = 0,0269 para IFN-γ). En lo que se refiere a las interleucinas IL-2 y TNF-α, no hubo diferencia significativa en sus concentraciones, en relación a los controles, después de la estimulación de los cultivos con el IFN-α. Se observó un aumento significativo de la concentración de células iNKT y su receptor de activación NKG2D en el tejido polipoide nasal, en relación con la mucosa sinusal de pacientes control. No hubo diferencia significativa en la concentración del receptor de inhibición KIR. Conclusión: El análisis de los resultados demuestra que el IFN-α alteró el patrón de citocinas en los sobrenadantes de los cultivos celulares de los pólipos nasales eosinofílicos. La estimulación de los cultivos con IFN-α produjo una disminución significativa de la concentración de IL-4 (perfil Th2) y un aumento significativo de la IL-10 (perfil regulatorio), del IFN-γ (perfil Th1) y de la IL-6 (pro-inflamatoria). Estas observaciones, en conjunto, sugieren que la acción del IFN-α, in vitro, promueve un rebalanceamiento de los perfiles inflamatorios en los cultivos celulares de los pólipos13 nasales eosinofílicos, favoreciendo la expresión de citocinas Th1 y regulatorias, en detrimento de las citocinas del patrón Th2. Los resultados demuestran también que el tejido polipoide nasal eosinofílico presenta significativamente mayor población de células iNKT y su receptor de activación NKG2D, en comparación con la mucosa sinusal control.Universidade Federal do Triângulo MineiroInstituto de Ciências da Saúde - ICS::Programa de Pós-Graduação em Ciências da SaúdeBrasilUFTMPrograma de Pós-Graduação em Ciências da SaúdeMICHELIN, Márcia Antoniazi11828808865http://lattes.cnpq.br/2599409028588669MURTA, Eddie Fernando Cândido47668032649http://lattes.cnpq.br/5724192420139830SOUSA, Julio Claudio2019-05-16T21:03:02Z2018-06-06info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfapplication/pdfSOUSA, Julio Claudio. Avaliação do perfil de citocinas em culturas celulares derivadas de pólipos nasais eosinofílicos (antes e após a ação do interferon-α) e pesquisa de células natural killer t invariante (iNKT) em pólipos nasais eosinofílicos. 2018. 105f. Tese (Doutorado em Ciências da Saúde) - Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Universidade Federal do Triângulo Mineiro, Uberaba, 2018.http://bdtd.uftm.edu.br/handle/tede/651porhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTMinstname:Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM)instacron:UFTM2019-07-22T18:11:39Zoai:bdtd.uftm.edu.br:tede/651Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://bdtd.uftm.edu.br/PUBhttp://bdtd.uftm.edu.br/oai/requestbdtd@uftm.edu.br||bdtd@uftm.edu.bropendoar:2024-04-24T09:59:51.943562Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM - Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM)false
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