Expressão e caracterização bioquímica parcial de uma serinoprotease recombinante da peçonha de Bothrops pauloensis
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Data de Publicação: | 2014 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Texto Completo: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15888 https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.366 |
Resumo: | CHAPTER II: The snake venom is composed by a diversity of biomolecules with many actions on physiological processes. The serine peptidases are a group of proteases present in the constitution of the venom, capable of interfering on several points of hemostasis. Some serine peptidases has thrombin-like activity, what makes them targets on the development of therapeutics agentes on the treatment of many hemostatic disorders. In this study, a recombinant thrombin-like serine peptidase called rBpSP-II was obtained from the cDNA of the venom gland of the snake Bothrops pauloensis and biochemically characterized. The cDNA correspondent to rBpSP-II was cloned on the pPICZαA vector and inserted on the methylotrophic yeast Pichia pastoris KM71H for the heterologous expression. This enzyme showed single band when analised on SDS-PAGE with approximated molecular mass of 44,5 kDa under reducing conditions. The enzyme rBpSP-II showed clotting activity on bovine plasma and proteolytic activity on fibrinogen, cleaving exclusively the Aα chain. The evaluation of rBpSP-II activity on chromogenic substrates showed that the enzyme has thrombin-like activity due to its capacity to hydrolyze the thrombin substrate. |
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2016-06-22T18:43:54Z2016-01-072016-06-22T18:43:54Z2014-07-29COSTA, Guilherme Nunes Moreira. Expressão e caracterização bioquímica parcial de uma serinoprotease recombinante da peçonha de Bothrops pauloensis. 2014. 80 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2014. Disponível em: https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.366https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15888https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.366CHAPTER II: The snake venom is composed by a diversity of biomolecules with many actions on physiological processes. The serine peptidases are a group of proteases present in the constitution of the venom, capable of interfering on several points of hemostasis. Some serine peptidases has thrombin-like activity, what makes them targets on the development of therapeutics agentes on the treatment of many hemostatic disorders. In this study, a recombinant thrombin-like serine peptidase called rBpSP-II was obtained from the cDNA of the venom gland of the snake Bothrops pauloensis and biochemically characterized. The cDNA correspondent to rBpSP-II was cloned on the pPICZαA vector and inserted on the methylotrophic yeast Pichia pastoris KM71H for the heterologous expression. This enzyme showed single band when analised on SDS-PAGE with approximated molecular mass of 44,5 kDa under reducing conditions. The enzyme rBpSP-II showed clotting activity on bovine plasma and proteolytic activity on fibrinogen, cleaving exclusively the Aα chain. The evaluation of rBpSP-II activity on chromogenic substrates showed that the enzyme has thrombin-like activity due to its capacity to hydrolyze the thrombin substrate.CAPÍTULO II: A peçonha de serpente é composta por uma diversidade de biomoléculas com inúmeras ações sobre os processos fisiológicos. As serinoproteases são um grupo de proteases presentes na constituição da peçonha, capazes de interferir em diversos pontos da hemostasia. Algumas serinoproteases possuem atividade semelhante à trombina, o que as tornam alvos de interesse no desenvolvimento de agentes terapêuticos no tratamento de desordens hemostáticas. Neste estudo, uma serinoprotease thrombin-like recombinante denominada rBpSP-II foi obtida a partir do cDNA da glândula da peçonha da serpente Bothrops pauloensis e caracterizada bioquimicamente. O cDNA correspondente à rBpSP-II foi clonado no vetor pPICZαA e inserido na levedura metilotrófica Pichia pastoris KM71H para a realização da expressão heteróloga. Esta enzima apresentou banda única quando analisada em SDS-PAGE com massa molecular aproximada de 44.5 kDa sob condições redutoras. A rBpSP-II apresentou atividade coagulante sobre plasma bovino e atividade proteolítica sobre o fibrinogênio, clivando preferencialmente a cadeia Aα. A avaliação da atividade da rBpSP-II sobre substratos cromogênicos demonstrou que a enzima possui atividade thrombin-like devido a sua capacidade de hidrolisar o substrato da trombina.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoMestre em Genética e Bioquímicaapplication/pdfporUniversidade Federal de UberlândiaPrograma de Pós-graduação em Genética e BioquímicaUFUBRCiências BiológicasBothrops pauloensisPeçonha de serpenteThrombin-likeSerinoproteaseExpressão heterólogaSerpente peçonhenta - PeçonhaBothropsSnake venomSerine peptidaseHeterologous expressionCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICAExpressão e caracterização bioquímica parcial de uma serinoprotease recombinante da peçonha de Bothrops pauloensisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisRodrigues, Renata Santoshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4701853U6Brandeburgo, Maria Inês Homsihttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4790922T9Oliveira, Fábio dehttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799971D5França, Johara Boldrinihttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4713373U9http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4389420P6Costa, Guilherme Nunes Moreira81763100info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFUTHUMBNAILExpressaoCaracterizacaoBioquimica.pdf.jpgExpressaoCaracterizacaoBioquimica.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1238https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15888/3/ExpressaoCaracterizacaoBioquimica.pdf.jpg9899e3311262ded855b702f6638377a9MD53ORIGINALExpressaoCaracterizacaoBioquimica.pdfapplication/pdf7483620https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15888/1/ExpressaoCaracterizacaoBioquimica.pdf2be49ee2518f06fb2de70980e8ba8fe8MD51TEXTExpressaoCaracterizacaoBioquimica.pdf.txtExpressaoCaracterizacaoBioquimica.pdf.txtExtracted texttext/plain124460https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15888/2/ExpressaoCaracterizacaoBioquimica.pdf.txt87e95cad2af2f744986980b07dacc636MD52123456789/158882021-08-10 15:00:03.759oai:repositorio.ufu.br:123456789/15888Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2021-08-10T18:00:03Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false |
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