Avaliação da suplementação do meio de maturação in vitro de ovócitos bovinos com beta-NGF

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Martins, Muller Cararra
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/41302
http://doi.org/10.14393/ufu.te.2023.7048
Resumo: The in vitro embryo production (IVP) is already a widely used and proven viable technique, however, it can be improved. A positive relationship was verified between the amount of Beta-NGF in sperm and cleavage and blastocyst rates in in vitro embryo production, so this is the first work that evaluates Beta-NGF supplementation in IVP media, aiming to identify Beta-NGF receptors (p75 and Trk), verify the effect on embryo production, identify the best concentration and evaluate the quality of the supplemented structures. Cumulus oocyte complexes (COC) were stained by indirect immunofluorescence for p75 and TrK receptors and evaluated by confocal microscopy and routine PIVEs were performed. Both receptors were localized to oocytes and cumulus cells. Supplemented PIVEs had better rates of cleavage and blastocyst formation (paired t-test, p < 0.05). To evaluate the cytoplasmic structure of in vitro matured oocytes, it was divided into two groups, with and without beta-NGF supplementation. Student's t test (p≤0.05) was chosen to verify whether there was a difference between the two treatments. The results showed that supplementation induced an increase in the amount of mitochondria (p≤0.0424), in addition to reducing the production of ROS (p≤0.0001), and consequently apoptosis and cell death (p≤0.0027. For the evaluation of the best concentration, the experiment was divided into three groups: control, supplementation with 100ng/ml and 500ng/ml, applying paired t test, p < 0.05. with protein supplementation in the improvement medium. cleavage was better in the 100 ng/ml group, blastocyst production showed no difference. Thus, we can say that supplementation with Beta-NGF can be a good alternative to improve IVP performance.
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Cumulus oocyte complexes (COC) were stained by indirect immunofluorescence for p75 and TrK receptors and evaluated by confocal microscopy and routine PIVEs were performed. Both receptors were localized to oocytes and cumulus cells. Supplemented PIVEs had better rates of cleavage and blastocyst formation (paired t-test, p < 0.05). To evaluate the cytoplasmic structure of in vitro matured oocytes, it was divided into two groups, with and without beta-NGF supplementation. Student's t test (p≤0.05) was chosen to verify whether there was a difference between the two treatments. The results showed that supplementation induced an increase in the amount of mitochondria (p≤0.0424), in addition to reducing the production of ROS (p≤0.0001), and consequently apoptosis and cell death (p≤0.0027. For the evaluation of the best concentration, the experiment was divided into three groups: control, supplementation with 100ng/ml and 500ng/ml, applying paired t test, p < 0.05. with protein supplementation in the improvement medium. cleavage was better in the 100 ng/ml group, blastocyst production showed no difference. Thus, we can say that supplementation with Beta-NGF can be a good alternative to improve IVP performance.Tese (Doutorado)A produção in vitro de embriões (PIVE) já é uma técnica muito utilizada e comprovadamente viável, porém, pode ser melhorada. Foi verificada uma correlação positiva entre a quantidade de Beta-NGF nos espermatozoides e as taxas de clivagem e de blastocisto na produção in vitro de embriões, assim este é o primeiro trabalho que avalia a suplementação de Beta-NGF nos meios de PIVE, tendo como objetivo identificar os receptores de Beta-NGF (p75 e Trk), verificar o efeito na produção de embriões, identificar qual a melhor concentração e avaliar a qualidade das estruturas suplementadas. Complexos cúmulo ovócito (COC) foram marcados por imunofluorescência indireta para receptores p75 e TrK e avaliados em microscopia confocal e foram realizadas rotinas de PIVEs. Ambos os receptores foram localizados nos ovócitos e nas células do cúmulo. As PIVEs suplementadas tiveram melhores taxas de clivagem e de formação de blastocistos (teste t pareado, p < 0,05). Para avaliar a estrutura citoplasmática dos ovócitos maturados in vitro, dividiu-se em dois grupos, com e sem suplementação de beta-NGF. Optou-se pelo teste t de Student (p≤0,05), para verificar se existia diferença entre os dois tratamentos. Os resultados mostraram que a suplementação induziu o aumento na quantidade de mitocôndrias (p≤0,0424), além de reduzir a produção de EROs (p≤0,0001), e consequentemente da apoptose e morte celular (p≤0,0027). Para a avaliação da melhor concentração, o experimento foi dividido em três grupos: controle, suplementação com 100ng/ml e 500 ng/ml, aplicando teste t pareado, (p < 0,05).com a suplementação da proteína no meio de maturação. A taxa de clivagem se mostrou melhor no grupo 100 ng/ml, já a produção de blastocisto não apresentou diferença. Assim, podemos afirmar que a suplementação com a Beta-NGF pode ser uma boa alternativa para melhorar o desempenho da PIVE.Universidade Federal de UberlândiaBrasilPrograma de Pós-graduação em Ciências VeterináriasBeletti, Marcelo Emíliohttp://lattes.cnpq.br/1895300906751714Lançoni, Renatahttp://lattes.cnpq.br/9206890353202351Santos, Ricarda Maria doshttp://lattes.cnpq.br/8488594585281010Nonato, AmandaFontes, Pedro Levy PizaMartins, Muller Cararra2024-03-04T13:40:15Z2024-03-04T13:40:15Z2023-04-26info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfMARTINS, Muller Carrara. Avaliação da suplementação do meio de maturação in vitro de ovócitos bovinos com beta-NGF. 2023. 96 f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2023. DOI http://doi.org/10.14393/ufu.te.2023.7048https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/41302http://doi.org/10.14393/ufu.te.2023.7048porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFU2024-03-05T06:19:14Zoai:repositorio.ufu.br:123456789/41302Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2024-03-05T06:19:14Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false
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