Produtos de excreção/secreção de strongyloides venezuelensis: aplicação ao diagnóstico da estrongiloidíase e caracterização de proteínas imunorreativas

• Autor(a) principal: Carvalho, Edson Fernando Goulart de
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
• Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/27027; http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2019.2384
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; CNPQ::OUTROS; Estrongiloidiase; Excreção/secreção; Excreção/secreção; Diagnóstico; Imunodiagnóstico; Strongyloides venezuelensis; Proteínas contendo domínio CAP; Estrongiloidíase; Superfamília CRISP; Strongyloidiasis,; Excretion/secretion; Immunodiagnostic; Proteins containing CAP domain; Superfamily CRISP

A estrongiloidíase humana é uma parasitose intestinal causada pelo nematódeo Strongyloides stercoralis com distribuição mundial e predominância em áreas tropicais e subtropicais. O diagnóstico parasitológico apresenta baixa sensibilidade devido à intermitente eliminação de larvas nas fezes e por aproximadamente 50% dos indivíduos acometidos serem assintomáticos. O diagnóstico sorológico, apesar de mais sensível, apresenta reatividade cruzada com outras parasitoses. A busca por antígenos que apresentem bons padrões diagnósticos, se faz necessário, e o uso de modelos experimentais podem auxiliar na obtenção de antígenos heterólogos aplicáveis ao diagnóstico. Strongyloides venezuelensis é frequentemente utilizado para avaliar a interação parasito-hospedeiro, os aspectos moleculares durante a infecção, a eficácia de novas terapias e outras características imunológicas da estrongiloidíase. O uso de produtos de excreção/secreção (E/S) de larvas filarioides de S. venezuelensis no diagnóstico da estrongiloidiase, apresenta-se como uma ferramenta promissora. O objetivo da pesquisa foi obter produtos de E/S de larvas filarioides de S. venezuelensis, aplicá-los no diagnóstico da estrongiloidiase e identificar e caracterizar parcialmente as proteínas imunorreativas. Testes ELISA para detecção de IgG anti-Strongyloides foram realizados, com amostras de soro de ratos experimentalmente infectados com S. venezuelensis ou de soro humano, utilizando extrato total salino (TS) e produtos E/S (RPMI E/S e PBS E/S). Immunoblotting foi realizado para detectar as frações proteicas imunorreativas, e posteriormente foram analisadas por espectrometria de massas e bioinformática. Todas as preparações detectaram IgG anti-Strongyloides com destaque para o RPMI E/S (Se = 83,3% e Es = 100%), na análise com soro de rato e PBS E/S (Se = 81,7% e Es = 88,9%) em amostras de soro humano. No immunoblotting foram identificadas bandas proteicas específicas com aproximadamente 17 kDa nas três preparações. Na análise de bioinformática, foram identificadas proteínas contendo domínio CAP pertencente a superfamília CRISP (A0A0K0FJA1) nas três preparações, no TS uma proteína ligante de cálcio, RPMI E/S duas proteínas contendo domínio CAP e PBS E/S uma proteína não caracterizada da família ADF/Cofilin. Em sua maioria as proteínas identificadas são produtos de E/S, apresentando sequências preditas como epítopos de célula B. Conclui-se que os produtos de E/S apresentaram desempenho diagnostico superior ao TS, tanto na estrongiloidiase experimental quanto humana. Bandas proteicas de 17 kDA especificas para Strongyloides, apresentaram em sua composição, proteínas contendo domínio CAP. A construção dos modelos tridimensionais das proteínas e suas validações foram satisfatórias e permitiram entender como essas proteínas apresentam sua conformação. A predição de epítopos de célula B, pelo programa Bepipred 2.0, identificou sequências como epítopos de célula B, podendo serem utilizadas como possíveis ferramentas diagnosticas, como também em testes vacinais.