Interação entre uma metaloprotease purificada da peçonha de Bothrops moojeni (BmooMP-alfa-I) e o fator de necrose tumoral (TNF): modelos de estudo in vitro e in vivo.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silva, Maraisa Cristina
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/25565
http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2018.18
Resumo: Considerei o trabalho como idioma misto português/inglês, mas a predominância do idioma é inglês.
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The present study aimed to evaluate whether the enzyme BmooMPalpha-I, a metalloprotease isolated from Bothrops moojeni venom, has some role in the inflammatory response in experimental models in vitro and in vivo. Isolation of the BmooMPalpha-I enzyme from the crude venom of the B. moojeni snake was performed using DEAE Sephacel, Sephadex G-75 and Benzamidine-Sepharose chromatography columns. Twodimensional (2D) electrophoresis showed degree of purity, molecular mass (Mr) and isoelectric point (pI) in non-reducing conditions only one protein spot can be evidenced (~ 23.0 kDa; pI 6.82). The levels of TNF determined by the ELISA method were significantly reduced in the presence of the enzyme BmooMP-alpha-I, suggesting that it exerts a proteolytic action on TNF, which was confirmed by the disappearance of this cytokine among the profile of protein bands in SDS- PAGE and Western Blotting. The macrophages assayed with PRR agonists, demonstrated a reduction in levels of TNF secreted by macrophages after their treatment with the enzyme BmooMP-alpha-I. In vivo studies (septic shock test and DSSinduced colitis) have also shown that BmooMP-alpha-I is able to reduce levels of circulating TNF and ameliorate other aspects of the inflammatory bowel disease. In conclusion, BmooMPalpha-I metalloprotease presents an anti-inflammatory profile of immune response, resulting from its direct action on the proinflammatory cytokine TNF.FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas GeraisTese (Doutorado)A inflamação é um processo essencial para manutenção da homeostase, envolvendo eventos vasculares, migração e ativação de leucócitos. No entanto, suas manifestações exacerbadas, geralmente mediadas pelo aumento do nível de citocinas pró-inflamatórias como o fator de necrose tumoral (TNF), podem resultar em doenças crônicas, como artrite reumatoíde, fibrose pulmonar e reações de hipersensibilidade. O presente estudo teve por objeto avaliar se a enzima BmooMP-alfa-I, uma metaloprotease isolada da peçonha de Bothrops moojeni, apresenta algum papel na resposta inflamatória em modelos experimentais in vitro e in vivo. Foi realizado o isolamento da enzima BmooMP- alfa -I, a partir da peçonha bruta da serpente B. moojeni, utilizando colunas de cromatografia DEAE Sephacel, Sephadex G-75 e BenzamidinaSepharose. A eletroforese bidimensional (2D) demonstrou grau de pureza, massa molecular (Mr) e ponto isoelétrico (pI) em condições não redutoras somente um spot protéico pode ser evidenciado (~23,0 kDa; pI 6,82). Os níveis de TNF determinados pelo método de ELISA foram reduzidos significativamente na presença da enzima BmooMP-alfa-I, sugerindo que a mesma exerce uma ação proteolítica sobre o TNF, que foi confirmada pelo desaparecimento desta citocina dentre o perfil de bandas proteícas no SDS-PAGE e Western Blotting. O ensaio com macrófagos ativados com agonistas de PRRs, demostrou uma redução níveis de TNF secretado pelos macrófagos após o seu tratamento com a enzima BmooMP-alfa-I. Estudos in vivo (ensaio do choque séptico e colite induzida por DSS) também mostraram que BmooMP-alfa-I é capaz de reduzir os níveis de TNF circulante e melhorar outros aspectos do quadro inflamatório intestinal. Em conclusão, a metaloprotease BmooMP-alfa-I apresenta um perfil antiinflamatório de reposta imunológica, resultante da sua ação direta sobre a citocina pró-inflamatória TNF.Universidade Federal de UberlândiaBrasilPrograma de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia AplicadasMineo, José RobertoSilva, Marcos Vinícius daJúnior, Odonírio AbraãoSantos, Renata RodriguesMadurro, João MarcosSilva, Maraisa Cristina2019-07-01T13:29:24Z2019-07-01T13:29:24Z2017-06-28info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfSILVA, Maraisa Cristina. Interação entre uma metaloprotease purificada da peçonha de Bothrops moojeni (BmooMP-alfa-I) e o fator de necrose tumoral (TNF): modelos de estudo in vitro e in vivo. 2017. 57 f. Tese (Doutorado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2017. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2018.18https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/25565http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2018.18porhttp://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFU2020-01-22T13:00:41Zoai:repositorio.ufu.br:123456789/25565Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2020-01-22T13:00:41Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false
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