Padronização do processo de descelularização para scaffolds biológicos
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2019 |
Tipo de documento: | Trabalho de conclusão de curso |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFU |
Texto Completo: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/30380 |
Resumo: | Currently, in the field of regenerative medicine several studies have been developed seeking mechanisms that can treat injuries, as well as replace or regenerate tissues that do not show good functioning. Tissue engineering is based on the use of matrix or scaffold that serves as a support template for cells of interest so that growth factors as well as signaling molecules are preserved. The use of biological scaffolds has been very promising because they are natural matrices, however, there is the possibility of immunogenic reaction and rejection, being necessary the application of techniques for elimination of cells. Thus, the objective of this study was to develop a decellularization protocol that allows the application of biological scaffold from porcine sclera in regenerative medicine. For this, five different protocols were tested with the appropriate modifications based on a model protocol, aiming to standardize an assay that respects the requirements determined by Crapo, Gilbert and Badylak (2011). After verification of the efficiency of the decellularization, it was observed that the Protocols A, B and C (benzonase 1 U/mL, 5 U/mL and 10 U/mL, respectively) were not efficient, presenting genomic DNA content higher than recommended. The Protocols D (DNase/RNase 80 U/mL) and E (DNase/RNase 8 U/mL, washing with water after detergent buffer and rotations of 100 rpm) presented the quantification of extracted DNA in accordance with the limit for efficient decellularization, with absence of residual genomic DNA and histology compatible with decellularized material. However, the E protocol was considered ideal due to the possible elimination of SDS residues, making the biomaterial less cytotoxic and biocompatible. This protocol was reproducible for application with larger amounts of samples, proving to be effective in the application on an industrial scale and can still be considered a fast and cost-effective protocol |
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Padronização do processo de descelularização para scaffolds biológicosDescellularization process standardization for biological scaffoldScaffoldEscleraDescelurarizaçãoMedicina regenerativaCNPQ::CIENCIAS DA SAUDECurrently, in the field of regenerative medicine several studies have been developed seeking mechanisms that can treat injuries, as well as replace or regenerate tissues that do not show good functioning. Tissue engineering is based on the use of matrix or scaffold that serves as a support template for cells of interest so that growth factors as well as signaling molecules are preserved. The use of biological scaffolds has been very promising because they are natural matrices, however, there is the possibility of immunogenic reaction and rejection, being necessary the application of techniques for elimination of cells. Thus, the objective of this study was to develop a decellularization protocol that allows the application of biological scaffold from porcine sclera in regenerative medicine. For this, five different protocols were tested with the appropriate modifications based on a model protocol, aiming to standardize an assay that respects the requirements determined by Crapo, Gilbert and Badylak (2011). After verification of the efficiency of the decellularization, it was observed that the Protocols A, B and C (benzonase 1 U/mL, 5 U/mL and 10 U/mL, respectively) were not efficient, presenting genomic DNA content higher than recommended. The Protocols D (DNase/RNase 80 U/mL) and E (DNase/RNase 8 U/mL, washing with water after detergent buffer and rotations of 100 rpm) presented the quantification of extracted DNA in accordance with the limit for efficient decellularization, with absence of residual genomic DNA and histology compatible with decellularized material. However, the E protocol was considered ideal due to the possible elimination of SDS residues, making the biomaterial less cytotoxic and biocompatible. This protocol was reproducible for application with larger amounts of samples, proving to be effective in the application on an industrial scale and can still be considered a fast and cost-effective protocolPesquisa sem auxílio de agências de fomentoTrabalho de Conclusão de Curso (Graduação)Atualmente, no âmbito da medicina regenerativa diversos estudos têm sido desenvolvidos buscando mecanismos que possam tratar lesões, assim como substituir ou regenerar tecidos que não apresentam bom funcionamento. A engenharia de tecidos baseia-se no uso de matriz ou scaffold que serve como molde de sustentação para as células de interesse, de forma que sejam preservados fatores de crescimento, bem como moléculas de sinalização. A utilização de scaffolds biológicos tem sido bastante promissora por se tratar de matrizes naturais, no entanto, há a possibilidade de reação imunogênica e rejeição, sendo necessária a aplicação de técnicas para eliminação de células. Deste modo, o objetivo deste estudo foi desenvolver um protocolo de descelularização que viabilize a aplicação de scaffold biológico proveniente de esclera suína no âmbito da medicina regenerativa. Para isso, foram testados cinco diferentes protocolos com as devidas modificações baseados em um protocolo modelo, visando padronizar um ensaio que respeitasse as exigências determinadas por Crapo, Gilbert e Badylak (2011). Após a verificação da eficiência da descelularização, observou-se que os Protocolos A, B e C (Benzonase 1 U/mL, 5 U/mL e 10 U/mL, respectivamente) não foram eficientes, apresentando conteúdo de DNA genômico acima do preconizado. Avaliando os Protocolos D (DNase/RNase 80 U/mL) e E (DNase/RNase 8 U/mL, lavagem com água pós tampão detergente e rotações de 100 rpm), a quantificação de DNA extraído apresentou-se de acordo com o limite estabelecido para uma descelularização eficiente, com ausência de DNA genômico residual e histologia compatível com material descelularizado. No entanto, o Protocolo E foi considerado ideal devido a possível eliminação de resíduos de SDS, tornando o biomaterial menos citotóxico e biocompatível. Este protocolo foi reprodutível para o uso com maiores quantidades de amostras, demonstrando ser eficaz na aplicação em escala industrial e ainda pode ser considerado um protocolo rápido e com importante custo-benefício.2021-07-25Universidade Federal de UberlândiaBrasilCiências BiológicasRodrigues, Claudia Mendonçahttp://lattes.cnpq.br/2173310802137194Goulart Filho, Luiz Ricardohttp://lattes.cnpq.br/6759395798493082Vecchi, Larahttp://lattes.cnpq.br/9476822610412231Vaz, Emilia Rezendehttp://lattes.cnpq.br/2218529966446949Lorenti, Sabrina2020-11-13T15:42:56Z2020-11-13T15:42:56Z2019-07-25info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisapplication/pdfLORENTI, Sabrina. Padronização do processo de descelularização para scaffolds biológicos. 2019. 29 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Ciências Biológicas) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2020.https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/30380porhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/us/info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFU2022-02-04T15:44:12Zoai:repositorio.ufu.br:123456789/30380Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2022-02-04T15:44:12Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false |
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