Isolamento e caracterização de peptídeos sintéticos em phage display pela interação com anticorpos policlonais anti-neuwiedase da peçonha bruta de Bothrops neuwiedi pauloensis
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Data de Publicação: | 2004 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFU |
Texto Completo: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/30566 http://doi.org/10.14393/ufu.di.2004.91 |
Resumo: | Neuwiedase (Neu) is a weakly bleeding metalloproteinase, component of the Bothrops neuwiedi pauloensis venom. On the present work, it was used polyclonal antibodies against Neu, capable of neutralizing the bleeding effects of the brute venom of Bothrops neuwiedi pauloensis. These antibodies were used to select immonureactive peptides by the “Phage Display” technology. This technique basically consists in many peptide selection cycles (“Biopanning”) of 12 aminoacid synthesized peptides from a library, expressed on the surface of bacteriophage viral capsides. After three “Biopanning” cycles, 86 phage clones were obtained, 53 of them were sequenced, resulting in 48 different peptide sequences. On total, 40 of these sequences presented positive immunoreactivity through the “Colony Blotting” assay, from where it was used the anti-Neuwiedase policlonal antibodies. Probably, it was not possible to determine all the toxin epitopes, however, the Neu 40NTVNGFFRSMN51 site was the place where there was the highest alignment numbers, indicating this site as a probable epitope. The NLGM and KYN motifs present on Neu and on the Bn13 and Bn22 clones, respectively, also occur on the non-bleeding metaloproteinases LHF-II, fibrolase e lebetase on the venom of Lachesis muta muta and ACLPREF of Agkistrodon contortrix laticinctus, Adamalysina-ll of Crotalus adamanteus, Atroxase, Atrolysina-C e Ht-b of C. atrox. These motifs are also present on the bleeding metaloproteinases BOJUMET I, BOJUMET II and BOJUMET III of Bothrops jararacuçu, besides the protrombine activating toxine Berythractivase of Bothrops erythromelas. The Bap 1 toxin of Bothrops asper has the TKYN and NXXFRS motifs, in common with Neu and the Bn 22 e Bn 13 peptides, respectively. These selected peptides can present a potential use on the antivenoms production, or even as vaccinal antigens. To this use, these clones are going to be tested very soon to their immunogenicity in vivo. |
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Isolamento e caracterização de peptídeos sintéticos em phage display pela interação com anticorpos policlonais anti-neuwiedase da peçonha bruta de Bothrops neuwiedi pauloensisIsolation and characterization of synthetic peptides in phage display by interaction with polyclonal anti-neuwiedase antibodies from Bothrops neuwiedi pauloensis crude venomNeuwiedaseMetaloproteinaseGenética e BioquímicaCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICABothropsPeptídeosNeuwiedase (Neu) is a weakly bleeding metalloproteinase, component of the Bothrops neuwiedi pauloensis venom. On the present work, it was used polyclonal antibodies against Neu, capable of neutralizing the bleeding effects of the brute venom of Bothrops neuwiedi pauloensis. These antibodies were used to select immonureactive peptides by the “Phage Display” technology. This technique basically consists in many peptide selection cycles (“Biopanning”) of 12 aminoacid synthesized peptides from a library, expressed on the surface of bacteriophage viral capsides. After three “Biopanning” cycles, 86 phage clones were obtained, 53 of them were sequenced, resulting in 48 different peptide sequences. On total, 40 of these sequences presented positive immunoreactivity through the “Colony Blotting” assay, from where it was used the anti-Neuwiedase policlonal antibodies. Probably, it was not possible to determine all the toxin epitopes, however, the Neu 40NTVNGFFRSMN51 site was the place where there was the highest alignment numbers, indicating this site as a probable epitope. The NLGM and KYN motifs present on Neu and on the Bn13 and Bn22 clones, respectively, also occur on the non-bleeding metaloproteinases LHF-II, fibrolase e lebetase on the venom of Lachesis muta muta and ACLPREF of Agkistrodon contortrix laticinctus, Adamalysina-ll of Crotalus adamanteus, Atroxase, Atrolysina-C e Ht-b of C. atrox. These motifs are also present on the bleeding metaloproteinases BOJUMET I, BOJUMET II and BOJUMET III of Bothrops jararacuçu, besides the protrombine activating toxine Berythractivase of Bothrops erythromelas. The Bap 1 toxin of Bothrops asper has the TKYN and NXXFRS motifs, in common with Neu and the Bn 22 e Bn 13 peptides, respectively. These selected peptides can present a potential use on the antivenoms production, or even as vaccinal antigens. To this use, these clones are going to be tested very soon to their immunogenicity in vivo.Dissertação (Mestrado)Neuwiedase (Neu) é uma metaloproteinase fracamente hemorrágica componente da peçonha de Bothrops neuwiedi pauloensis (jararaca pintada). No presente trabalho, utilizou-se um soro de anticorpos policlonais contra Neu, capazes de neutralizar os efeitos hemorrágicos da peçonha bruta de Bothrops neuwiedi pauloensis. Estes anticorpos foram utilizados para selecionar peptídeos imunorretivos de uma biblioteca de peptídeos sintéticos com 12 aminoácidos, expressos na superfície do capsídeo viral de bacteriófagos (“Phage display”). O processo consiste basicamente em vários ciclos de seleção (“Biopanning”). Após três ciclos de “Biopanning” foram obtidos 86 clones de fagos, destes 53 foram seqüenciados, resultando em 48 seqüências peptídicas diferentes. No total, 35 destas seqüências apresentaram imunorreatividade positiva através do ensaio de “Colony Blotting”, onde foram utilizados os anticorpos policlonais anti-Neuwiedase. Provavelmente, não foi possível determinar todos os epítopos da toxina, porém, o sitio 40NTVNGFFRSMN51 da Neu foi o local onde houve o maior número de alinhamentos, indicando este sítio como um provável epítopo. Os motivos NLGM e KYN presentes na Neu e nos clones Bn13 e Bn22, respectivamente, ocorrem também nas metaloproteinases não hemorrágicas LHF-II, fibrolase e lebetase da peçonha da serpente Lachesis muta muta e ACLPREF de Agkistrodon contortrix laticinctus, Adamalysina-ll de Crotalus adamanteus, Atroxase, Atrolysina-C e Ht-b de C. atrox. Estes motivos também estão presentes nas metaloproteinases hemorrágicas BOJUMET I, BOJUMET II e BOJUMET III de Bothrops jararacuçu, além da toxina ativadora de protrombina Berythractivase de Bothrops erythromelas. A toxina Bap 1 de Bothrops asper possui os motivos TKYN e NXXFRS comuns com a Neu e os peptídeos Bn 22 e Bn 13 respectivamente. Estes peptídeos selecionados podem apresentar um potencial uso na produção de soro antiofídico ou até mesmo como antígenos vacinais. Para esta finalidade, estes clones serão testados muito em breve quanto a sua imunogenicidade in vivo.Universidade Federal de UberlândiaBrasilPrograma de Pós-graduação em Genética e BioquímicaGoulart Filho, Luiz RicardoBrandeburgo, Maria Inês HomsiCardoso, Rone2020-12-07T12:19:10Z2020-12-07T12:19:10Z2004info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfCARDOSO, Rone. Isolamento e caracterização de peptídeos sintéticos em phage display pela interação com anticorpos policlonais anti-neuwiedase da peçonha bruta de Bothrops neuwiedi pauloensis. 2004. 57 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2020. DOI http://doi.org/10.14393/ufu.di.2004.91https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/30566http://doi.org/10.14393/ufu.di.2004.91porhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/us/info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFU2020-12-08T06:16:05Zoai:repositorio.ufu.br:123456789/30566Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2020-12-08T06:16:05Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false |
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