Disfunção endotelial pela inibição da síntese de óxido nítrico: proposta e caracterização de um modelo celular in vitro

• Autor(a) principal: Silva, Fernanda Cardoso da
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
• Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/28981; http://doi.org/10.14393/ufu.di.2020.283
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Óxido nítrico; L-NAME; Estresse oxidativo; p22phox; Disfunção endotelial; Nitric oxide; Oxidative stress; Endothelial dysfunction

O endotélio é um tipo de tecido epitelial, formado por uma única camada de células, que recobre internamente os vasos sanguíneos e é essencial para a manutenção da homeostase vascular, garantida pela produção de biomoléculas vasoativas. Um desequilíbrio na biodisponibilidade dessas biomoléculas pode desencadear um estado patológico, como a disfunção endotelial (DE), que se caracteriza, principalmente, pela redução na disponibilidade do óxido nítrico (NO) e por um aumento na produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). Dada a importância do entendimento da disfunção endotelial para o progresso de patologias como a aterosclerose, por exemplo, faz-se necessário o desenvolvimento de modelos experimentais que simulem tal condição. Assim, esse estudo foi realizado visando desenvolver e caracterizar um modelo celular in vitro de DE pela inibição da síntese de NO. Inicialmente, realizou-se o tratamento das células endoteliais derivadas do timo (linhagem tEnd.1) com o inibidor da síntese de NO (L-NAME) nas concentrações 1µM, 10 µM, 100 µM e 1mM por 12, 24, 48, 72, 96 e 120 horas, com e sem retratamento a cada 24 horas. Posteriormente, determinou-se as melhores condições de tratamento para indução de um estado de DE nas células, a partir da avaliação da viabilidade celular e da concentração de nitrito. Os tratamentos com 10 µM e 100 µM de L-NAME, nos tempos de 72 horas sem retratamento e de 96 horas com retratamento foram selecionados. Em seguida, realizou-se a qPCR para os genes p22phox, p47phox e eNOS. Os resultados foram significativos para o p22phox, em que os níveis relativos de mRNA do gene foram reduzidos em 65% em resposta ao tratamento com L-NAME 100 µM por 96 horas com retratamento. A análise da expressão proteica da eNOS por Western blotting não foi bem-sucedida. Por fim, os resultados de avaliação de peroxidação lipídica pela técnica de Buege e Aust não foram estatisticamente significativos. Em conjunto, os resultados apontam que o tratamento com L-NAME 100 µM por 96 horas com retratamento foi capaz de induzir a DE, diminuindo a disponibilidade de NO, a qual foi verificada tanto pela redução na concentração de nitrito quanto pela redução na expressão de p22phox. Entretanto, estudos adicionais, sobretudo visando aprofundar o papel das EROs nas células submetidas ao tratamento com L-NAME, são necessários para o aprimoramento e caracterização do modelo experimental proposto.