Proteômica comparativa das cepas 9a5c e fb7 de xylella fastidiosa

• Autor(a) principal: Souza, Jessica Brito de
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
• Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/22956; http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.808
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA MOLECULAR E DE MICROORGANISMOS; Fitopatógeno; Virulência; Lipase; Phytopathogen; Virulence; Genética; Fitopatologia; Vírus de plantas

Xylella fastidiosa é uma bactéria Gram-negativa e não flagelada responsável por colonizar o xilema de várias plantas cultivadas e selvagens encontradas em todo o mundo. Nas últimas décadas, tem sido bem estudada devido à importância deste fitopatógeno como agente causador de duas principais doenças, a Clorose Variegada dos Citros (CVC), no Brasil e na Argentina, e a Doença de Pierce (PD) nos Estados Unidos. Algumas cepas de X.fastidiosa têm seus genomas completamente ou parcialmente elucidados, como: 9a5c, isolado de laranja no estado de São Paulo e a cepa Fb7, isolada da laranja na região de Corrientes na Argentina. Baseando-se na análise genômica entre 9a5c e Fb7, e também na importância de uma lipase/esterase na patogenicidade de X.fastidiosa, o objetivo deste trabalho foi analisar e identificar os fatores associados à patogenicidade e virulência de X.fastidiosa 9a5c e Fb7. A fim de visualizar a presença de LesA nas amostras de proteínas totais e secretadas das cepas 9a5c e Fb7, testes esterásico e lipásico foram realizados. A atividade lipásica foi analisada cultivando a bactéria em meio de cultura suplementado com 1% de tributirina. Este teste demonstrou atividade sob os triacilgliceróis de cadeia curta presentes no meio e pode ser visualizado pela maior formação do halo na cepa Fb7. A atividade de esterase, determinada pelo substrato 4-metilumbelliferilbutirato (4-MUB), apresentou valores significativos e claramente expressos. Assim, a estirpe Fb7 apresentou atividade consideravelmente maior quando comparada com 9a5c. Em busca de outros fatores de virulência, foi realizado uma cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa (LC-MS/MS) das proteínas totais das culturas de X.fastidiosa de ambas as cepas. Nesta análise, foi possível identificar 119 proteínas diferencialmente expressas. Dentre elas, algumas proteínas com funções associadas a virulência da bactéria foram superexpressas na cepa Fb7, comparado a cepa 9a5c. A análise de RT-qPCR permitiu validar a expressão de algumas dessas proteínas. Os resultados demonstraram que a LesA e outras proteínas com níveis de expressão superior em Fb7, desempenham um importante papel de patogenicidade nesta cepa. Dessa forma, são fatores que podem explicar a maior virulência da cepa Fb7 quando comparado a cepa 9a5c.