Padronização de extração de DNA de bacteriófago

• Autor(a) principal: Alcântara, Naiara machado de
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
• Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/21653
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Bacteriófago; DNA; Bacteriophage

A resistência bacteriana aos antibióticos convencionais tem se tornado cada vez mais recorrente, tornando-se um grave problema para a saúde pública. Isso tem sido um estímulo para o estudo de novas formas de tratamento, seja com outras substâncias antimicrobianas, ou com terapias alternativas, como a terapia com fagos. Esta é tida como uma forma de controle biológico, utilizando bacteriófagos que são vírus que infectam de maneira especifica as células bacterianas. Esse trabalho utilizou do bacteriófago modelo T4 na infecção da bactéria Escherichia coli cepa B4. Assim, cultivou-se o vírus na bactéria hospedeira e, após a eliminação do DNA e RNA bacteriano, o vírus foi concentrado utilizando polietilenoglicol/NaCl. Em seguida, o vírus foi lisado utilizando proteinase K/SDS e o DNA foi extraído com fenol/clorofórmio, seguido de precipitação com acetato de sódio/isopropanol. Após centrifugação, o precipitado foi lavado com etanol 70%, ressuspenso em tampão Tris-EDTA e submetido à eletroforese em gel de agarose. Esse protocolo foi base para mais dois outros protocolos testados, com alterações na concentração e incubação do PEG, e alteração do tempo de incubação para precipitação com acetato de sódio e isopropanol. Utilizando o protocolo C obtido após as alterações, observou-se DNA com massa molecular acima de 20 Kbp. Assim, será possível obter DNA de outros bacteriófagos, para caracterização e avaliação do seu potencial na lise de células bacterianas.