Efeito do selante de fibrina BthTL combinado ao peptídeo de ação mimética ao TNF na regeneração nervosa periférica

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Oliveira, Tárika Gonçalves do Carmo
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/25070
http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2019.12
Resumo: Surgical intervention is necessary whenever peripheral nerve laceration occurs. Using tubular prostheses that guide and protect injury area and the possibility of inserting, within this prosthesis, drugs and molecules that act positively in nerve regeneration is a perspective in the current clinics and can serve as an alternative for standard tools of nerve repair. Our aim was to investigate the effect of BthTL fibrin sealant, associated or not to a synthetic TNF mimetic peptide, on axonal regeneration and functional recovery of sciatic nerve after neurotmese. For this purpose, Wistar rats were submitted to left sciatic nerve neurotmese and subsequent tubulization surgery. Three groups were formed: empty tube, tube+glue group (filled with fibrin sealant), and tube+glue+pep group (filled with sealant mixed with TNF mimetic peptide). Animals were analyzed for sensory and motor function over 45 days. At the end of this period, animals were euthanized and nerves were collected for immunostaining (neurofilament, GAP43, S100-β, NGFRp75 and Iba-1) and for transmission and light electron microscopy in order to count myelinated, unmyelinated and degenerated fibers, as well as for evaluation of the morphometric analysis of regenerated fibers (diameter of myelin fibers, diameter of myelin axons, thickness of myelin sheath and g ratio). Histopathological analysis and collagen staining were also performed. Our data did not show motor or sensory functional recovery. Intense inflammatory infiltrate with a higher Iba-1 expression and increased NGFRp75 receptor, which characterizes Schwann cell regenerative phenotype, was seen in the presence of the BthTL sealant associated to peptide. In addition, this group had higher myelin thickness and fiber diameter and more type III collagen. Nerves extracted from sealant tubes showed intermediate results between empty tube and tube+glue+pep for NGFRp75, inflammation and collagen; on fiber counts, these nerves showed more degenerate fibers and fewer unmyelinated axons than any group. Empty tube group showed superiority only in GAP43 expression. Altogether, our data suggest that the sealant associated to TNF mimetic peptide induced greater local inflammation influencing the Schwann cells in order to act positively in the process of peripheral nerve regeneration.
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For this purpose, Wistar rats were submitted to left sciatic nerve neurotmese and subsequent tubulization surgery. Three groups were formed: empty tube, tube+glue group (filled with fibrin sealant), and tube+glue+pep group (filled with sealant mixed with TNF mimetic peptide). Animals were analyzed for sensory and motor function over 45 days. At the end of this period, animals were euthanized and nerves were collected for immunostaining (neurofilament, GAP43, S100-β, NGFRp75 and Iba-1) and for transmission and light electron microscopy in order to count myelinated, unmyelinated and degenerated fibers, as well as for evaluation of the morphometric analysis of regenerated fibers (diameter of myelin fibers, diameter of myelin axons, thickness of myelin sheath and g ratio). Histopathological analysis and collagen staining were also performed. Our data did not show motor or sensory functional recovery. Intense inflammatory infiltrate with a higher Iba-1 expression and increased NGFRp75 receptor, which characterizes Schwann cell regenerative phenotype, was seen in the presence of the BthTL sealant associated to peptide. In addition, this group had higher myelin thickness and fiber diameter and more type III collagen. Nerves extracted from sealant tubes showed intermediate results between empty tube and tube+glue+pep for NGFRp75, inflammation and collagen; on fiber counts, these nerves showed more degenerate fibers and fewer unmyelinated axons than any group. Empty tube group showed superiority only in GAP43 expression. Altogether, our data suggest that the sealant associated to TNF mimetic peptide induced greater local inflammation influencing the Schwann cells in order to act positively in the process of peripheral nerve regeneration.CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorDissertação (Mestrado)Nas lesões em que se tem secção total do segmento nervoso (lesão do tipo neurotmese), faz-se necessária intervenção cirúrgica. O uso de próteses tubulares que orientam e protegem a área de lesão e a possibilidade de, dentro dessa prótese, se inserir drogas e moléculas que atuem de forma positiva no processo de regeneração nervosa é uma perspectiva na clínica atual, podendo servir como alternativa às ferramentas cirúrgicas já utilizadas. Nosso objetivo foi investigar o efeito do selante de fibrina BthTL associado ou não ao peptídeo de ação mimética ao TNF, na regeneração axonal e na recuperação funcional do nervo isquiático após neurotmese. Para tanto, submetemos ratos Wistar à neurotmese do nervo isquiático esquerdo e posterior cirurgia de tubulização. Três grupos foram constituídos: tubo vazio, grupo tubo+cola (preenchido por selante de fibrina),e, grupo tubo+cola+pep (preenchido com selante misturado ao peptídeo de ação mimética ao TNF). Os animais foram analisados quanto a função sensitiva e motora ao longo de 45 dias. Ao final desse período, os animais foram eutanasiados e os nervos foram coletados para realização de imunomarcações (neurofilamento, GAP43, S100-β, NGFRp75 e Iba-1) e de microscopia eletrônica de transmissão e de luz para a contagens de fibras regeneradas, degeneradas, amielínicas, além da análise morfométrica de fibras regeneradas (diâmetro das fibras mielínicas, diâmetro dos axônios mielínicos, espessura da bainha de mielina e razão g). Adicionalmente, realizou-se análise histopatológica nos nervos e coloração para colágeno. Em nossas análises, nenhum grupo mostrou recuperação funcional motora ou sensitiva. Intenso infiltrado inflamatório na presença do selante BthTL em associação ao peptídeo juntamente com uma maior expressão de Iba-1, e, aumento do receptor NGFRp75 que caracteriza fenótipo regenerativo das células de Schwann. Além disso, esse grupo apresentou maiores espessura de mielina e diâmetro da fibra e mais colágeno tipo III. Os nervos extraídos de tubos com selante apenas apresentaram resultados intermediários entre tubo vazio e tubo+cola+pep para NGFRp75, inflamação e colágeno, e, na contagem de fibras, mostrou mais fibras degeneradas e menos axônios amielínicos do que qualquer grupo. O grupo tubo vazio somente mostrou superioridade na expressão de GAP43. Esses resultados sugerem que o selante junto com o peptídeo induziram maior inflamação local influenciando as células de Schwann no sentido de atuarem positivamente no processo de regeneração nervosa periférica.Universidade Federal de UberlândiaBrasilPrograma de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural AplicadasZanon, Renata Gracielehttp://lattes.cnpq.br/2943313641276308Silveira, Alexandre Barcelos Morais dahttp://lattes.cnpq.br/1605637893329695Boni, Robson Aparecido dos Santoshttp://lattes.cnpq.br/9127383834800930Oliveira, Tárika Gonçalves do Carmo2019-05-08T14:49:31Z2019-05-08T14:49:31Z2019-03-22info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfOLIVEIRA, Tárika Gonçalves do Carmo. Efeito do selante de fibrina BthTL combinado ao peptídeo de ação mimética ao TNF na regeneração nervosa periférica. 2019. 58 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, 2019. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2019.12https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/25070http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2019.12porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFU2021-05-01T03:00:00Zoai:repositorio.ufu.br:123456789/25070Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2021-05-01T03:00Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false
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