Anticorpos IgY policlonais anti-fosfolipase A2: ferramenta auxiliar para o estudo da ação anti-parasitária

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Borges, Isabela Pacheco
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/27483
http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2019.2148
Resumo: As fosfolipases (PLAs) têm sido associadas à patogênese em vários microorganismos. Estas estão envolvidas em processos de invasão celular, virulência, sobrevivência e remodelamento/modificação da composição de fosfolipídios de células hospedeiras e, portanto, cresce o interesse nessas enzimas como potenciais alvos para o controle do parasitismo. Nesse cenário, ovos de galinha imunizados com BnSP-7, uma fosfolipase A2 Lys49 (PLA2) homóloga isolada da peçonha de Bothrops pauloensis, representam uma excelente fonte de anticorpos policlonais com potencial atividade inibitória sobre PLAs parasitárias. Neste trabalho, relatamos a produção, caracterização e efeito antiparasitário de anticorpos IgY a partir de gemas de ovos imunizados com BnSP-7. Os anticorpos produzidos apresentaram avidez e afinidade crescentes para epítopos de PLA2s antigênicas durante a imunização. Os anticorpos anti-BnSP-7 IgY purificados em gemas de ovos foram capazes de reconhecer especificamente diferentes PLA2s das peçonhas de Bothrops pauloensis e Bothrops jararacussu e inibir atividade citotóxica da BnSP-7 em células C2C12. Além disso, os anticorpos reconheceram alvos em extratos de Leishmania (Leishmania) amazonensis e Toxoplasma gondii por meio de ensaios de ELISA e imunofluorescência. Anticorpos anti-BnSP-7 IgY foram citotóxicos para taquizoitos de T. gondii e promastigotas de L. (L.) amazonensis, foram capazes de diminuir a proliferação de ambos os parasitas tratados antes da infecção e inbiram a invasão de formas promstigotas de L. (L.) amazonensis. Por fim os anticorpos anti-BnSP-7 foram utilizados para construção de um imunosensor, o qual foi capaz de detectar a BnSP-7 e alvos no extrato de L. (L.) amazonensis com alta afinidade e seletividade. Analisados em conjunto, os resultados deste estudo sugerem que os anticorpos anti-BnSP-7 IgY representam uma ferramenta importante para descobrir novos alvos parasitas, bloquear os efeitos parasitários e servir como uma ferramenta de diagnóstico.
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spelling 2019-12-03T13:09:31Z2019-12-03T13:09:31Z2019-07-24BORGES, Isabela Pacheco. Anticorpos IgY policlonais anti-fosfolipase A2: ferramenta auxiliar para o estudo da ação anti-parasitária. 2019. 165 f. Tese (Doutorado em Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2019. Disponível em: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2019.2148https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/27483http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2019.2148As fosfolipases (PLAs) têm sido associadas à patogênese em vários microorganismos. Estas estão envolvidas em processos de invasão celular, virulência, sobrevivência e remodelamento/modificação da composição de fosfolipídios de células hospedeiras e, portanto, cresce o interesse nessas enzimas como potenciais alvos para o controle do parasitismo. Nesse cenário, ovos de galinha imunizados com BnSP-7, uma fosfolipase A2 Lys49 (PLA2) homóloga isolada da peçonha de Bothrops pauloensis, representam uma excelente fonte de anticorpos policlonais com potencial atividade inibitória sobre PLAs parasitárias. Neste trabalho, relatamos a produção, caracterização e efeito antiparasitário de anticorpos IgY a partir de gemas de ovos imunizados com BnSP-7. Os anticorpos produzidos apresentaram avidez e afinidade crescentes para epítopos de PLA2s antigênicas durante a imunização. Os anticorpos anti-BnSP-7 IgY purificados em gemas de ovos foram capazes de reconhecer especificamente diferentes PLA2s das peçonhas de Bothrops pauloensis e Bothrops jararacussu e inibir atividade citotóxica da BnSP-7 em células C2C12. Além disso, os anticorpos reconheceram alvos em extratos de Leishmania (Leishmania) amazonensis e Toxoplasma gondii por meio de ensaios de ELISA e imunofluorescência. Anticorpos anti-BnSP-7 IgY foram citotóxicos para taquizoitos de T. gondii e promastigotas de L. (L.) amazonensis, foram capazes de diminuir a proliferação de ambos os parasitas tratados antes da infecção e inbiram a invasão de formas promstigotas de L. (L.) amazonensis. Por fim os anticorpos anti-BnSP-7 foram utilizados para construção de um imunosensor, o qual foi capaz de detectar a BnSP-7 e alvos no extrato de L. (L.) amazonensis com alta afinidade e seletividade. Analisados em conjunto, os resultados deste estudo sugerem que os anticorpos anti-BnSP-7 IgY representam uma ferramenta importante para descobrir novos alvos parasitas, bloquear os efeitos parasitários e servir como uma ferramenta de diagnóstico.Activities of phospholipases (PLAs) have been linked to pathogenesis in various microorganisms. These are involved in processes of cell invasion, virulence, survival and remodeling / modification of the host cell phospholipid composition so the interest in these enzymes as potential targets that could contribute to the control of parasite survival and proliferation. Chicken eggs immunized with BnSP-7, a Lys49 phospholipase A2 (PLA2) homologue from Bothrops pauloensis snake venom, represent an excellent source of polyclonal antibodies with potential inhibitory activity on parasite PLAs. Herein, we report the production, characterization and anti-parasitic effect of IgY antibodies from egg yolks of hens immunized with BnSP-7. Produced antibodies presented increasing avidity and affinity for antigenic toxin epitopes throughout immunization, attaining a plateau after 4 weeks. Pooled egg yolks-purified anti-BnSP-7 IgY antibodies were able to specifically recognize different PLA2s from Bothrops pauloensis and Bothrops jararacussu venom. Antibodies also neutralized BnSP-7 cytotoxic activity in C2C12 cells. In addition, the antibodies recognized targets in Leishmania (Leishmania) amazonensis and Toxoplasma gondii extracts by ELISA and immunofluorescence assays. Anti-BnSP-7 IgY antibodies were cytotoxic to T. gondii tachyzoites and L. (L.) amazonensis promastigotes were able to decrease the proliferation of both parasites treated prior to infection and inhibit the invasion of promentigotes forms of L. (L.) amazonensis. Finally, anti-BnSP-7 antibodies were used to construct a nanocomposite modified graphite immunosensor, that could detect BnSP-7 and targets in L. (L.) amazonensis extract. These data suggest that anti-BnSP-7 IgY is an important tool for discovering new parasite targets, blocking parasitic effects and serving as a diagnostic tool.CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorTese (Doutorado)porUniversidade Federal de UberlândiaPrograma de Pós-graduação em Genética e BioquímicaBrasilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/us/info:eu-repo/semantics/openAccessCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::QUIMICA DE MACROMOLECULASBothrops pauloensisToxoplasma gondiiFosfolipase A2Leishmania (Leishmania) amazonensisPeçonha de serpentePhospholipase A2Snake venomAnticorpos IgY policlonais anti-fosfolipase A2: ferramenta auxiliar para o estudo da ação anti-parasitáriaIgY Anti-phospholipase poyclonal antibodies: auxiliary tool for the study of antipasitary actioninfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisÁvila, Veridiana de Melo Rodrigueshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4720590E9&tokenCaptchar=03AOLTBLTR5wR0pU9HDbA5F4sDbcecYWgj1g67auSX_3Ev-fWroASwy6mvtKHoDQenfWq_DvGZHR-IXDkES6v5O6UoCkszE8e-gjcxamNu5Iyt9DZSBAYRrGWO6-CNq90HSXf3_Aya_WmX7MMT_3exLMxJjo1m6RDrX8LgElcR0h26Ofa_rjgDUaQhWjfLoERXLnNEIYfaL9VOeDWEB93lORiUBRPLsJVYAdzlzVj0z_0B6SSYP-_OQY6PPfdjEt6LQpTlYz92g4ZwLHN5akq4fH2p_y9Ff3nxN7tZMwyyiIxR8quNNY9O_q5rxKgZtJT_D2VfToR4YyyJfw7tSvAeBGpMcCmYPcErQ_6BtEPEM1DKpDeqRFFAyr3u33rMsiC6zUbXpD5Ie6nibBhV3mAovuHgYXELM6Nx-WmteSSEcC8F8ih8S1tl0eFvOlymTNTqp6yB2pJ_9UiSoDQwG9T2epQotkZKBAGddWLwVX9RLsrxuZs5sjqERdfgVgx9mHSq136rczJ7DUqCGomes, Angélica de OliveiraCosta, Tássia RafaellaSimamoto, Bruna Barbosa de SouzaLopes, Daiana Silvahttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4389892P9Borges, Isabela Pacheco1436549932484dded87-3b91-4412-9e29-2affbc466f62reponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFUCC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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