“Western Blotting” utilizando antígeno de Strongyloides ratti na detecção de IgG sérica na Estrongiloidíase Humana

• Autor(a) principal: Silva, Luciana Pereira
• Data de Publicação: 2000
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
• Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/26948; http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2000.11
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA; Western Blotting; Strongyloides ratti; IgG sérica; Estrongiloidíase Humana; Serum IgG; Human Strongyloidiasis

A estrongiloidíase humana é uma doença parasitária cosmopolita que ocupa o quinto lugar dentre as helmintíases com estimativa de mais de 50 milhões de pessoas infectadas. O modelo animal com Strongyloides ratti viabiliza a produção de larvas filarióides em laboratório permitindo o desenvolvimento de ensaios biológicos. Este trabalho teve como objetivo utilizar o teste “Western blotting” (WB) em amostras de soro empregando-se extrato salino de S ratti no diagnóstico da estrongiloidíase humana comparando-o com os testes de Imunofluorescência Indireta (I.F.I.) e Enzime-Linked immunosorbent Assay (ELISA). Foram analisadas 180 amostras de soro, sendo 80 de pacientes que estavam eliminando larvas de S. stercoralis nas fezes, 60 de pacientes com outras parasitoses e 40 de indivíduos sadios. S. ratti foi obtido de cultura de fezes de Rattus rattus infectados experimentalmente. Anticorpos IgG séricos foram detectados pelo teste I.F.I. utilizando-se como antígeno cortes de 4 micras de larvas filarióides de S. ratti. Para os testes ELISA e WB utilizou-se como antígeno extrato salino de larvas filariódes de S. ratti. O WB foi realizado com gamaglobulina de coelho imune e amostras de soro dos pacientes. Foram considerados imunodominantes os marcadores antigênicos: 8, 10, 14, 17, 20, 23, 26, 30, 33, 35, 46, 55, 60, 70, 78, 81, 85, 90, 105, 117, 126 e 138 kDa. O reconhecimento de duas ou mais proteínas imunodominantes pelas amostras de soro dos indivíduos estudados foi utilizado como critério de positividade para o teste de WB. Os peptídeos imunodominantes (14, 17, 20, 30, 35, 55 e 78 kDa) foram reconhecidos pela gamaglobulina de coelho imune e coincidiram com os peptídeos imunodominantes detectados pelas amostras de soro dos pacientes com estrongiloidíase. Ocorreram reações cruzadas com ancilostomídeo (2 casos) e Trichuris trichiura (1 caso). As sensibilidades e as especificidades dos testes I.F.I., ELISA e WB foram, 90%, 100%, 98,7% e 100%, 98% e 93%, respectivamente. Houve concordância positiva para os três testes em 90% dos casos com estrongiloidíase. A concordância negativa nos três testes foi de 91,7% e 95%, respectivamente para os pacientes com outras parasitoses e indivíduos sadios. Nos casos com resultados de I.F.I.- e ELISA+, o WB definiu o diagnóstico. Comparando-se os três testes não houveram outras possibilidades discordantes além das citadas acima. Conclui-se que o WB utilizando extrato salino de S. ratti foi capaz de reconhecer 22 peptídeos imunodominantes e definiu o diagnóstico em casos de sorologia discordantes (I.F.I.-/ELISA+) além de apresentar índices elevados tanto em sensibilidade quanto em especificidade nos testes I.F.I., ELISA e o WB analisados na detecção de IgG sérica no diagnóstico da estrongiloidíase humana