Identificação de peptídeos imunorreativos contra IgG de soro de pacientes com câncer de próstata por meio da tecnologia phage display

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Santos, Fabiana de Almeida Araújo
Data de Publicação: 2007
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15779
Resumo: Prostate cancer is the second cause of death in men by tumor, surpassed only by lung cancer. Therefore, the identification of new cancer specific antigens and genes may provide important biomarkers for diagnosis and instruments for the development of new treatment strategies. In this investigation the phage display technology have been used to select ligand peptides to serum antibodies of patients with prostate cancer in order to use them in diagnosis as serological biomarkers. Selection of phages was performed in three steps using a random peptide library of 12 residues (Ph.D.-12) expressed in fusion with the pIII protein of the M13 bacteriophage. The first two selection steps consisted of a pre clearing using the phage libraries against sera antibodies (IgG) of healthy individuals, followed by a second selection against total proteins of patients with benign prostatic hyperplasia. After subtraction, the library was submitted to a positive selection against purified IgG from patients with prostate cancer and ligand phages of interest were eluted by affinity with total proteins from prostate tumor tissues. Selected phages were amplified, and DNA was sequenced, translated and submitted to bioinformatic analyzes and ELISA assays. Similarities were found between peptide sequences and proteins deposited in GeneBank associated with adhesion, intra and intercellular trafficking and transcriptional regulation. Among 12 selected peptides, eight presented differential immune reactivity for cancer detection, and four clones for benign prostatic hyperplasia, which may become potential biomarkers for diagnosis of these pathologies.
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The first two selection steps consisted of a pre clearing using the phage libraries against sera antibodies (IgG) of healthy individuals, followed by a second selection against total proteins of patients with benign prostatic hyperplasia. After subtraction, the library was submitted to a positive selection against purified IgG from patients with prostate cancer and ligand phages of interest were eluted by affinity with total proteins from prostate tumor tissues. Selected phages were amplified, and DNA was sequenced, translated and submitted to bioinformatic analyzes and ELISA assays. Similarities were found between peptide sequences and proteins deposited in GeneBank associated with adhesion, intra and intercellular trafficking and transcriptional regulation. Among 12 selected peptides, eight presented differential immune reactivity for cancer detection, and four clones for benign prostatic hyperplasia, which may become potential biomarkers for diagnosis of these pathologies.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorMestre em Genética e BioquímicaO câncer de próstata é a segunda causa de óbitos por câncer em homens, sendo superado apenas pelo câncer de pulmão. Atualmente o único marcador sérico na avaliação clínica é o PSA. Portanto, a identificação de novos antígenos ou genes específicos do câncer de próstata pode prover novos biomarcadores e fornecer instrumentos para o desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas. Neste trabalho foi utilizada a técnica de phage display para isolar peptídeos ligantes a anticorpos presente no soro de pacientes com câncer de próstata para obtenção de biomarcadores que possam ser utilizados no diagnóstico sorológico dessa patologia. Para seleção dos peptídeos foi realizado um bioppaning subtrativo utilizando uma biblioteca de peptídeos Ph.D.-12 expressa na superfície do fago filamentoso M13. Em cada ciclo foram feitas duas seleções subtrativas, uma com anticorpos (IgG) de indivíduos sadios, e uma segunda seleção com extrato protéico de pacientes com hiperplasia prostática benigna (HPB). Após esta subtração, a biblioteca foi submetida a uma seleção positiva contra IgG de pacientes com câncer de próstata e os fagos ligantes de interesse foram eluídos por afinidade com proteínas totais de tecidos prostáticos tumorais. O DNA dos fagos selecionados foi seqüenciado, traduzido e submetido às análises de bioinformática e sorológica (ELISA). Os peptídeos obtidos apresentaram similaridades nos alinhamentos com diversas proteínas relacionadas com processos tumorais, tais como adesão, transporte intra e intercelular e regulação gênica. Dentre os 12 peptídeos selecionados, oito apresentaram imunorreatividade diferencial para o câncer e quatro clones para o HPB, podendo ser potenciais biomarcadores no diagnóstico destas doenças.Universidade Federal de UberlândiaBRPrograma de Pós-graduação em Genética e BioquímicaCiências BiológicasUFUFreschi, Ana Paula Pereshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4707328U6Goulart Filho, Luiz Ricardohttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781012P8Gimba, Etel Rodrigues Pereirahttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727071A9Lopes, José Danielhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787022P9Santos, Fabiana de Almeida Araújo2016-06-22T18:43:37Z2014-02-072016-06-22T18:43:37Z2007-07-05info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfapplication/pdfSANTOS, Fabiana de Almeida Araújo. Identificação de peptídeos imunorreativos contra IgG de soro de pacientes com câncer de próstata por meio da tecnologia phage display. 2007. 78 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2007.https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15779porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFU2016-06-23T07:19:42Zoai:repositorio.ufu.br:123456789/15779Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2016-06-23T07:19:42Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false
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