Efeito dos extratos etan?licos de partes a?reas e de ra?zes de Eriosema campestre var. macrophyllum (Grear) Fortunato sobre ativa??o e prolifera??o de linf?citos, in vitro

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Santos, Michaelle Geralda dos
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFVJM
Texto Completo: http://acervo.ufvjm.edu.br/jspui/handle/1/1918
Resumo: O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - Brasil (CAPES) - C?digo de Financiamento 001.
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Programa Multic?ntrico de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Fisiol?gicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, Diamantina, 2018.http://acervo.ufvjm.edu.br/jspui/handle/1/1918O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - Brasil (CAPES) - C?digo de Financiamento 001.A Eriosema campestre var. macrophyllum (Grear) Fortunato ? uma planta nativa do Cerrado brasileiro e tem sido utilizada no Vale do Jequitinhonha pelas vias oral e t?pica como antiinflamat?ria. Tendo em vista a escassez de estudos acerca da atividade biol?gica, o objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito dos extratos etan?licos de partes a?reas e de ra?zes de Eriosema campestre (ETEC-AE e ETEC-RA, respectivamente) sobre a ativa??o e prolifera??o de linf?citos, in vitro. Primeiramente, foi avaliada a citotoxicidade dos extratos sobre c?lulas mononucleares do sangue perif?rico (PBMC) humano, ap?s 24 horas ou 5 dias de cultura, pelo m?todo de exclus?o com azul de Tripan. Concentra??es n?o t?xicas de ETEC-AE e ETEC-RA foram utilizadas para avaliar o efeito dos extratos sobre a prolifera??o de linf?citos e suas subpopula??es TCD4 e TCD8, pelo decaimento da fluoresc?ncia de c?lulas marcadas com VPD450, em culturas de 5 dias estimuladas pela fitohemaglutinina (PHA). Foi avaliado tamb?m o efeito dos extratos sobre a express?o de CD25, a cadeia ? do receptor de IL-2 (IL-2R), bem como a produ??o e express?o g?nica de IL-2. Os extratos inibiram a prolifera??o de linf?citos totais e de suas subpopula??es, reduziram a produ??o e express?o g?nica de IL-2, mas n?o tiveram efeito sobre a express?o de CD25. Em seguida, foi avaliada a resposta proliferativa de linf?citos adicionando-se os extratos em diferentes tempos ap?s a ativa??o das culturas celulares. O efeito antiproliferativo foi mais pronunciado com a adi??o dos extratos at? 24 horas ap?s o est?mulo, sugerindo que a inibi??o da resposta proliferativa por ETEC-AE e ETEC-RA ocorre devido ? a??o dos mesmos sobre elementos bioqu?micos atuantes em etapas iniciais e tardias da fase G1 do processo de divis?o dos linf?citos T. Na sequ?ncia, a an?lise do ciclo celular de linf?citos estimulados com PHA e tratados com os extratos vegetais revelou uma reten??o dessas c?lulas na fase G1 do ciclo, o que contribui para a redu??o da prolifera??o observada anteriormente. Tendo em vista a participa??o de ciclinas na regula??o do processo de divis?o celular, foi investigado o efeito de ETEC-AE e ETEC-RA sobre a express?o g?nica das ciclinas D2, D3, E, A1 e B1. Os extratos inibiram a express?o g?nica da ciclina D2. Al?m da atividade dos extratos sobre par?metros relacionados ? prolifera??o celular, foi avaliado se os mesmos teriam efeito sobre a resposta efetora dos linf?citos e suas subpopula??es TCD4 e TCD8, por meio da investiga??o da produ??o das citocinas IFN-? e TNF-? em culturas estimuladas com PMA e ionomicina e tratadas com ETEC-AE ou ETEC-RA. Os extratos n?o tiveram efeito sobre a produ??o dessas citocinas. Para determinar as principais classes de metab?litos secund?rios presentes na planta que poderiam ser respons?veis pelos efeitos encontrados e direcionar an?lises qu?micas posteriores, foi realizada a triagem fitoqu?mica por meio de rea??es cromog?nicas e de precipita??o, sendo poss?vel sugerir a presen?a de flavonoides, saponinas e triterpenos em partes a?reas e ra?zes, al?m de taninos em partes a?reas. Os dados obtidos indicam que ETEC-AE e ETEC-RA apresentam efeito inibit?rio sobre a resposta proliferativa de linf?citos e de suas subpopula??es T CD4 e T CD8, sendo que este efeito parece estar associado ? inibi??o da entrada de linf?citos T na fase S do ciclo celular devido ? redu??o na express?o g?nica da ciclina D2 e, provavelmente em vias de sinaliza??o na fase G1 tardia. Al?m disso, os resultados sugerem que os extratos atuam reduzindo a produ??o e express?o g?nica da citocina IL-2. Pode-se sugerir que subst?ncias da classe dos flavonoides podem ser respons?veis pelos efeitos biol?gicos observados conforme apontado para outras esp?cies do g?nero Eriosema. Dessa forma, o trabalho pode explicar, pelo menos em parte, os atributos terap?uticos da planta na medicina popular.Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2019-03-08T16:03:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) michaelle_geralda_santos.pdf: 2339075 bytes, checksum: bbbacc98eccc3c84fd4063beef60ffae (MD5)Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2019-03-30T11:48:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) michaelle_geralda_santos.pdf: 2339075 bytes, checksum: bbbacc98eccc3c84fd4063beef60ffae (MD5)Made available in DSpace on 2019-03-30T11:48:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) michaelle_geralda_santos.pdf: 2339075 bytes, checksum: bbbacc98eccc3c84fd4063beef60ffae (MD5) Previous issue date: 2018Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES)Tese (Doutorado) ? Programa Multic?ntrico de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Fisiol?gicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2018.The Eriosema campestre var. macrophyllum (Grear) Fortunato is a plant native to the Brazilian Cerrado and has been used in the Jequitinhonha Valley via oral and topical as antiinflammatory. The objective of the present work was to investigate the effect of ethanolic extracts of aerial parts and roots of Eriosema campestre (ETEC-AE and ETEC-RA, respectively) on the activation and proliferation of lymphocytes in vitro. Firstly, the cytotoxicity of the extracts on human peripheral blood mononuclear cells (PBMC), after 24 hours or 5 days of culture, was evaluated by the Trypan blue exclusion method. Non-toxic concentrations of ETEC-AE and ETEC-RA were used to evaluate the effect of extracts on the proliferation of lymphocytes and their TCD4 and TCD8 subpopulations by the decay of fluorescence of VPD450-labeled cells in Phytohemagglutinin-stimulated 5-day cultures (PHA). The effect of the extracts on the expression of CD25, the ?-chain of the IL-2 receptor (IL-2R), as well as the production and gene expression of IL-2, were also evaluated. The extracts inhibited the proliferation of total lymphocytes and their subpopulations, reduced IL- 2 production and gene expression, but had no effect on CD25 expression. Then, the proliferative response of lymphocytes was evaluated by adding the extracts at different times after the activation of the cell cultures. The antiproliferative effect was more pronounced with the addition of the extracts up to 24 hours after the stimulus, suggesting that the inhibition of the proliferative response by ETEC-AE and ETEC-RA occurs due to the acting on biochemical elements in the initial and late stages of the G1 phase of the T lymphocyte division process. In the sequence, the cell cycle analysis of PHA-stimulated lymphocytes treated with the plant extracts revealed a retention of these cells in the G1 phase of the cycle, which contributes to the reduction of the proliferation observed previously. The effect of ETEC-AE and ETEC-RA on the gene expression of cyclins D2, D3, E, A1 and B1 was investigated. The extracts inhibited the cyclin D2 gene expression. In addition to the activity of the extracts on parameters related to cell proliferation, it was evaluated whether they had an effect on the effector response of lymphocytes and their TCD4 and TCD8 subpopulations, by investigating the production of IFN-? and TNF-? cytokines in stimulated cultures and treated with ETEC-AE or ETEC-RA. The extracts had no effect on the production of these cytokines. To determine the main classes of secondary metabolites present in the plant that could be responsible for the effects found and to direct subsequent chemical analyzes, phytochemical screening was performed through chromogenic and precipitation reactions, and it is possible to suggest the presence of flavonoids, saponins and triterpenes in aerial parts and roots, as well as tannins in aerial parts. The data obtained indicate that ETEC-AE and ETEC-RA have an inhibitory effect on the proliferative response of lymphocytes and their CD4 and CD8 T subpopulations, and this effect seems to be associated with the inhibition of T lymphocyte entry in the S phase of the cycle due to the reduction in the gene expression of cyclin D2 and probably in signaling pathways in the late G1 phase. In addition, the results suggest that the extracts act by reducing the production and gene expression of IL-2 cytokine. It may be suggested that substances of the flavonoid class may be responsible for the observed biological effects as pointed out for other species of the genus Eriosema. In this way, the work can explain, at least in part, the therapeutic attributes of the plant in popular medicine.porUFVJMA concess?o da licen?a deste item refere-se ao ? termo de autoriza??o impresso assinado pelo autor, assim como na licen?a Creative Commons, com as seguintes condi??es: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publica??o, autorizo a Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri e o IBICT a disponibilizar por meio de seus reposit?rios, sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei n? 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permiss?es assinaladas, para fins de leitura, impress?o e/ou download, a t?tulo de divulga??o da produ??o cient?fica brasileira, e preserva??o, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessEfeito dos extratos etan?licos de partes a?reas e de ra?zes de Eriosema campestre var. macrophyllum (Grear) Fortunato sobre ativa??o e prolifera??o de linf?citos, in vitroinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisEriosema campestreProlifera??o celularIL-2CiclinasCell proliferationCyclinsreponame:Repositório Institucional da UFVJMinstname:Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM)instacron:UFVJMTEXTmichaelle_geralda_santos.pdf.txtmichaelle_geralda_santos.pdf.txtExtracted texttext/plain285256http://acervo.ufvjm.edu.br/jspui/bitstream/1/1918/6/michaelle_geralda_santos.pdf.txted9017e7a05ff3374d89a64d79dccb74MD56LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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