Análise da composição química, atividade citotóxica e inibição de citocinas in vitro de preparações de partes aéreas da planta ageratum fastigiatum
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Resumo: | Ageratum fastigiatum é uma planta utilizada na medicina popular como anti-inflamatório e analgésico, no entanto, poucos estudos foram realizados a fim de detalhar os mecanismos envolvidos nessa atividade. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade anti-inflamatória in vitro do óleo essencial e do extrato diclorometânico de A. fastigiatum. Pela técnica de exclusão do azul de tripam por citometria de fluxo foram determinadas concentrações não tóxicas das preparações de A. fastigiatum. As concentrações não tóxicas do óleo essencial foram 5x10-3 e 1x10-2 µL/mL. Essas concentrações foram utilizadas para a pesquisa do potencial anti-inflamatório do óleo essencial, medido por meio da análise do perfil de citocinas pro (TNF- α e IFN- γ) e anti-inflamatórias (IL-10), em culturas de leucócitos humanos estimulados e não estimulados com PMA (acetato de forbol miristato) . Os dados demonstraram que ambas as concentrações inibiram o percentual de linfócitos-TNF+ nas culturas estimuladas com PMA. A análise cromatográfica em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG/EM) revelou como principais constituintes no óleo essencial as substâncias α-pineno (7,51%), limoneno (5,9%), óxido de cariofileno (13,59%), 1,2 epóxido humuleno (8,41%) e 1,6-humulanodien-3-ol (17,71%). O extrato diclorometânico de A. fastigiatum, na concentração 20 µg/mL, não apresentou toxicidade aos leucócitos do sangue periférico humano e reduziu o percentual de linfócitos-TNF-α+ e linfócitos-IFN-γ+ nas culturas estimuladas com o PMA. Este extrato foi fracionado em coluna de Sephadex LH-20 (150 g). Na análise de citocinas, a fração 10 (AFDM 10), na concentração 10 µg/mL, demonstrou efeito anti-inflamatório in vitro reduzindo a frequência de linfócitos-TNF-α+ e a proliferação de linfócitos estimulados com PHA (fitohemaglutinina). Sugere-se que parte da atividade anti-inflamatória de A. fastigiatum se dê pela inibição que os constituintes da planta promovem sobre a ativação de leucócitos. |
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Freitas, Bethânia Alves de AvelarFrancischi, Janetti NogueiraLopes, Miriam Teresa pazMiranda, João Luiz deMendonça, Vanessa AmaralRocha-Vieira, EtelUniversidade Fedaral dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM)Melo, Gustavo Eustáquio Brito Alvim de2014-12-17T15:41:09Z2014-12-17T15:41:09Z20132013-09-13FREITAS, Bethânia Alves de Avelar. Análise da composição química, atividade citotóxica e inibição de citocinas in vitro de preparações de partes aéreas da planta ageratum fastigiatum. 2013. 105 p. Tese (Doutorado) – Programa Multicêntrico de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, Diamantina, 2013.https://acervo.ufvjm.edu.br/items/0c512712-81d9-46fe-a110-899bed28c239Ageratum fastigiatum é uma planta utilizada na medicina popular como anti-inflamatório e analgésico, no entanto, poucos estudos foram realizados a fim de detalhar os mecanismos envolvidos nessa atividade. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade anti-inflamatória in vitro do óleo essencial e do extrato diclorometânico de A. fastigiatum. Pela técnica de exclusão do azul de tripam por citometria de fluxo foram determinadas concentrações não tóxicas das preparações de A. fastigiatum. As concentrações não tóxicas do óleo essencial foram 5x10-3 e 1x10-2 µL/mL. Essas concentrações foram utilizadas para a pesquisa do potencial anti-inflamatório do óleo essencial, medido por meio da análise do perfil de citocinas pro (TNF- α e IFN- γ) e anti-inflamatórias (IL-10), em culturas de leucócitos humanos estimulados e não estimulados com PMA (acetato de forbol miristato) . Os dados demonstraram que ambas as concentrações inibiram o percentual de linfócitos-TNF+ nas culturas estimuladas com PMA. A análise cromatográfica em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG/EM) revelou como principais constituintes no óleo essencial as substâncias α-pineno (7,51%), limoneno (5,9%), óxido de cariofileno (13,59%), 1,2 epóxido humuleno (8,41%) e 1,6-humulanodien-3-ol (17,71%). O extrato diclorometânico de A. fastigiatum, na concentração 20 µg/mL, não apresentou toxicidade aos leucócitos do sangue periférico humano e reduziu o percentual de linfócitos-TNF-α+ e linfócitos-IFN-γ+ nas culturas estimuladas com o PMA. Este extrato foi fracionado em coluna de Sephadex LH-20 (150 g). Na análise de citocinas, a fração 10 (AFDM 10), na concentração 10 µg/mL, demonstrou efeito anti-inflamatório in vitro reduzindo a frequência de linfócitos-TNF-α+ e a proliferação de linfócitos estimulados com PHA (fitohemaglutinina). Sugere-se que parte da atividade anti-inflamatória de A. fastigiatum se dê pela inibição que os constituintes da planta promovem sobre a ativação de leucócitos.Tese (Doutorado) – Programa Multicêntrico de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2013.ABSTRACT Ageratum fastigiatum is a plant used in folk medicine as topical anti-inflammatory and analgesic agent. However, few studies have been conducted with this plant in order to detail the molecular mechanisms involved in its biological activities. Therefore, main purpose of the present study was to investigate the anti-inflammatory activity of the essential oil and leaf rinse dichloromethane of A. fastigiatum extract. The cytotoxicity of the compounds was assessed by means of trypan blue exclusion. The essential oil at 5x10-3 e 1x10-2 µL/ did not present cytotoxic activity. These two concentrations were used for investigating the anti-inflammatory potential of the essential oil, by analyzing the pro-inflammatory (TNF-α and IFN-γ) and anti-inflammatory (IL-10) cytokine profiles on human leukocyte cultures stimulated and non-stimulated with PMA (phorbol myristate acetate). The data obtained by flow cytometry demonstrated that both concentrations decreased the percentage of lymphocytes –TNF-α + on the cell cultures stimulated with PMA. In the non-stimulated cell cultures there were no changes in the percentage of IL-10+ cells. The gas phase chromatography coupled with mass spectrometry analysis (GC/MS) revealed that the main compounds present in oil samples were: α-pinene (7.51%), limonene (5.9%), caryophyllene oxide (13.59%), 1,2 humulene epoxide (8.41%) and 1,6-humulanodien-3-ol (17.71%). The dichloromethane extract of A. fastigiatum, obtained from the washing leaves, at the concentration 20 µg/mL, did not presented cytotoxicic action on the human peripheral blood leukocytes. Following the same protocol performed to cytokines analysis used before, we observed that the dichloromethane A. fastigiatum extract also decreased the percentage of lymphocytes-TNF-α + and IFN-γ+ on the cell cultures stimulated with PMA. This extract after fractionated on Sephadex LH-20 . The dichloromethane A. fastigiatum fraction (AFDM 10) at 10 µg/mL reducing the frequency of lymphocytes-TNF-α+. Furthermore AFDM 10 decreasing the proliferation of lymphocytes stimulated with PHA (phytohemagglutinin). It is concluded that part of the anti-inflammatory activity of A. fastigiatum is give by inhibiting the plant constituents on promoting the activation of leukocytes.porUFVJMA concessão da licença deste item refere-se ao à termo de autorização impresso assinado pelo autor, assim como na licença Creative Commons, com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri e o IBICT a disponibilizar por meio de seus repositórios, sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, e preservação, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessAnálise da composição química, atividade citotóxica e inibição de citocinas in vitro de preparações de partes aéreas da planta ageratum fastigiatuminfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisAgeratum fastigiatumAnti-inflamatórioPlanta medicinalÓleo essencialExtrato diclorometânicoreponame:Repositório Institucional da UFVJMinstname:Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM)instacron:UFVJMTHUMBNAILbethania_alves_avelar_freitas.pdf.jpgbethania_alves_avelar_freitas.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg3255https://acervo.ufvjm.edu.br//bitstreams/a01c4678-9a5f-468b-85b6-38f731d2f6bc/downloadb715a316a4d7a8ee50d5270d213e3b7dMD57falseAnonymousREADORIGINALbethania_alves_avelar_freitas.pdfbethania_alves_avelar_freitas.pdfapplication/pdf67938565https://acervo.ufvjm.edu.br//bitstreams/fb8054d0-bc55-44c8-98b1-0c73de96a7da/download4f06416afedd4040fb61d7bad494c673MD51trueAnonymousREADCC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; 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