Análise do comportamento proliferativo de uma linhagem de Saccharomyces cerevisiae por citometria de fluxo

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Rodrigues, Camila Cristina
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFVJM
Texto Completo: https://acervo.ufvjm.edu.br/items/ebb9d006-f215-43bf-8243-f0f7e645b621
Resumo: As leveduras do gênero Saccharomyces, em especial as da espécie Saccharomyces cerevisiae, são microrganismos eucarióticos unicelulares do Reino Fungi. Possuem um papel importante em processos de fermentação, como na utilização para a produção de bebidas alcoólicas e pães, sendo considerados micro-organismos seguros para alimentos. O monitoramento das matérias-primas e da proliferação de leveduras é uma necessidade para o sucesso do processo fermentativo. Nesse sentido, a citometria de fluxo, que é um método rápido e preciso, pode se apresentar como ferramenta promissora no campo da fermentação e no controle de bioprocessos. Assim, o objetivo desse trabalho foi realizar a análise do crescimento e heterogeneidade populacional de uma linhagem comercial de Saccharomyces cerevisiae pela técnica de citometria de fluxo. Para isso foi utilizada a marcação intracelular com o fluorocromo éster succinimidílico de diacetato de carboxifluoresceína. A suspensão de levedura incorporada com o fluorocromo foi transferida para tubos de ensaio contendo 10 mL de YEPD e incubada a 25º C e foram analisadas, após diferentes tempos, por citometria de fluxo, microscopia confocal e espectrofotometria. Os resultados demonstraram que foi possível observar, por citometria de fluxo, alterações morfológicas da linhagem Saccharomyces cerevisiae ao longo do tempo, bem como quantificar o decaimento da fluorescência do corante CFSE após sucessivos processos mitóticos. Por essa técnica também foi possível mensurar o número de células da linhagem estudada ao longo do processo de multiplicação comparando-se às outras metodologias comumente utilizadas para este fim. Conclui-se com esse estudo que a citometria de fluxo mostrou-se como uma ferramenta confiável e sensível para a análise do crescimento e heterogeneidade populacional de Saccharomyces cerevisiae.
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Possuem um papel importante em processos de fermentação, como na utilização para a produção de bebidas alcoólicas e pães, sendo considerados micro-organismos seguros para alimentos. O monitoramento das matérias-primas e da proliferação de leveduras é uma necessidade para o sucesso do processo fermentativo. Nesse sentido, a citometria de fluxo, que é um método rápido e preciso, pode se apresentar como ferramenta promissora no campo da fermentação e no controle de bioprocessos. Assim, o objetivo desse trabalho foi realizar a análise do crescimento e heterogeneidade populacional de uma linhagem comercial de Saccharomyces cerevisiae pela técnica de citometria de fluxo. Para isso foi utilizada a marcação intracelular com o fluorocromo éster succinimidílico de diacetato de carboxifluoresceína. A suspensão de levedura incorporada com o fluorocromo foi transferida para tubos de ensaio contendo 10 mL de YEPD e incubada a 25º C e foram analisadas, após diferentes tempos, por citometria de fluxo, microscopia confocal e espectrofotometria. Os resultados demonstraram que foi possível observar, por citometria de fluxo, alterações morfológicas da linhagem Saccharomyces cerevisiae ao longo do tempo, bem como quantificar o decaimento da fluorescência do corante CFSE após sucessivos processos mitóticos. Por essa técnica também foi possível mensurar o número de células da linhagem estudada ao longo do processo de multiplicação comparando-se às outras metodologias comumente utilizadas para este fim. Conclui-se com esse estudo que a citometria de fluxo mostrou-se como uma ferramenta confiável e sensível para a análise do crescimento e heterogeneidade populacional de Saccharomyces cerevisiae.Dissertação (Mestrado) – Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2017.Yeasts of the genus Saccharomyces, especially those of the species Saccharomyces cerevisiae, are unicellular eukaryotic microorganisms of the Fungi Kingdom. They have an important role in fermentation processes, such as in the use for the production of alcoholic beverages and breads, being considered microorganisms safe for food. The monitoring of raw materials and the proliferation of yeasts is a necessity for the success of the fermentation process. In this sense, flow cytometry, which is a fast and precise method, can be presented as a promising tool in the field of fermentation and in the control of bioprocesses. Thus, the objective of this work was to analyze the growth and population heterogeneity of a commercial strain of Saccharomyces cerevisiae by the flow cytometry technique. For this, intracellular labeling was used with the fluorochrome succinimidyl ester of carboxyfluorescein diacetate. The yeast suspension incorporated with the fluorochrome was transferred into test tubes containing 10 ml of YEPD and incubated at 25 ° C and analyzed after different times by flow cytometry, confocal microscopy and spectrophotometry. The results demonstrated that it was possible to observe, by flow cytometry, morphological alterations of the Saccharomyces cerevisiae lineage over time, as well as to quantify the decay of CFSE dye fluorescence after successive mitotic processes. By this technique it was also possible to measure the number of cells of the lineage studied throughout the multiplication process, comparing to the other methodologies commonly used for this purpose. It is concluded with this study that flow cytometry proved to be a reliable and sensitive tool for the analysis of the growth and population heterogeneity of Saccharomyces cerevisiae.porUFVJMA concessão da licença deste item refere-se ao à termo de autorização impresso assinado pelo autor, assim como na licença Creative Commons, com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri e o IBICT a disponibilizar por meio de seus repositórios, sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, e preservação, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessAnálise do comportamento proliferativo de uma linhagem de Saccharomyces cerevisiae por citometria de fluxoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisProcessos fermentativosProliferaçãoSaccharomyces cerevisiaeCitometria de fluxoFermentative processesProliferationFlow cytometryreponame:Repositório Institucional da UFVJMinstname:Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM)instacron:UFVJMTHUMBNAILcamila_cristina_rodrigues.pdf.jpgcamila_cristina_rodrigues.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg2820https://acervo.ufvjm.edu.br//bitstreams/4732d3b1-509b-42ec-9e3c-63a1eb350fbd/download365fae6e123f356ff9a15a70d29774b5MD57falseAnonymousREADORIGINALcamila_cristina_rodrigues.pdfcamila_cristina_rodrigues.pdfapplication/pdf1879433https://acervo.ufvjm.edu.br//bitstreams/46e2e1fe-5e8d-4c1c-81f1-b937cef12e24/download62f0da52d006b25928023dcba20ee6c0MD51trueAnonymousREADCC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; 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