Pept?deo antimicrobiano homotarsinina: s?ntese, estudos reacionais de dimeriza??o e ensaios de citotoxicidade

• Autor(a) principal: Guimar?es, Carlos Felipe Reis Costa
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFVJM
• Texto Completo: http://acervo.ufvjm.edu.br:8080/jspui/handle/1/291
• topic: Pept?deo antimicrobiano; An?lise conformacional de pept?deos; S?ntese em fase s?lida; Phyllomedusa tarsius; Homotarsinina

Neste trabalho foi estudada a influ?ncia dos efeitos estruturais na rea??o de dimeriza??o associada ? obten??o do pept?deo antimicrobiano homotarsinina (Htr), bem como foram realizados ensaios hemol?ticos e de toxicidade desse pept?deo perante c?lulas humanas. Primeiramente foi realizada a s?ntese da cadeia monom?rica da homotarsinina (Htr-M), empregando-se a estrat?gia Fmoc de s?ntese em fase s?lida. Em seguida, o produto foi purificado por cromatografia l?quida de alta efici?ncia em fase reversa (CLAE-FR), tendo sido o homod?mero obtido sequenciado e caracterizado por espectrometria de massas (MALDI-ToF). Foram realizados estudos das prefer?ncias conformacionais da Htr-M por dicro?smo circular (CD) em diferentes meios e condi??es, como na presen?a de tamp?o Tris-HCl aquoso, em diferentes misturas de TFE-H2O e na presen?a de micelas de SDS. Realizou-se ent?o a rea??o de dimeriza??o do mon?mero em tr?s meios: (i) solu??o tamp?o Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8,5, (ii) solu??o micelar de SDS 350 mmol?L-1 em tamp?o Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8,5 e (iii) solu??o TFE:H2O 40:60 (v/v) em Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8,5. O acompanhamento cin?tico das rea??es de dimeriza??o foi realizado por CLAE-FR. Como resultado, foi observado que em solu??o micelar de SDS a rea??o se completa em aproximadamente 6h (rendimento de 62%), enquanto que em solu??o tamp?o e em solu??o de TFE:H2O s?o necess?rias 24h e 48h (rendimentos de 66% e 85%), respectivamente. Os resultados de CD obtidos para a Htr-M em condi??es similares ?s empregadas nas rea??es de dimeriza??o mostraram que a Htr-M apresenta predominantemente conforma??o rand?mica em tamp?o Tris-HCl aquoso, enquanto adota predominantemente estrutura de h?lice ? em solu??o de TFE:H2O (40:60) ou na presen?a de micelas de SDS. Assim, os resultados do acompanhamento cin?tico da rea??o de dimeriza??o indicam que a conforma??o predominantemente rand?mica da Htr-M em tamp?o Tris-HCl aquoso, bem como a diminui??o de sua mobilidade e maior intera??o com a superf?cie das micelas de SDS e os efeitos de agrega??o que ocorrem em solu??o de TFE:H2O influenciam diretamente na forma de aproxima??o das cadeias monom?ricas, atuando de maneiras diferentes na forma??o da liga??o dissulfeto. Por fim, foram realizados ensaios de toxicidade em c?lulas humanas, os quais mostraram que Htr-M e Htr n?o apresentam toxicidade a leuc?citos mononucleares, al?m do que tamb?m n?o apresentam atividade hemol?tica.