Desenvolvimento de um imunosensor pela t?cnica de resson?ncia de pl?smons de superf?cie para detec??o em tempo real de anticorpos anti - leishmania infantum

• Autor(a) principal: Souto, D?nio Emanuel Pires
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFVJM
• Texto Completo: http://acervo.ufvjm.edu.br:8080/jspui/handle/1/516
• topic: Qu?mica; Ci?ncias Exatas; Qu?mica Anal?tica; Resson?ncia de pl?smons de superf?cie; Monocamada auto-organizada; Imunosensor; Leishmaniose visceral; anti ? L. infantum

Neste trabalho, foi realizado o desenvolvimento de um imunosensor para detec??o de anticorpos anti-Leishmania infantum. O princ?pio de transdu??o foi a Resson?ncia de Pl?smons de Superf?cie (SPR) e o sensor foi produzido atrav?s da imobiliza??o covalente de ant?genos sol?veis de Leishmania infantum sobre Monocamada Auto-Organizada (SAM) do ?cido 11-Mercaptoundecan?ico (11-MUA) ativado pela mistura contendo 100,0 mmol.L-1 de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) e 150 mmol.L-1 de N-hidroxisuccinimida (NHS). Atrav?s das t?cnicas de Voltametria C?clica e Redu??o Dessortiva por Voltametria de Pulso Diferencial o processo de forma??o da SAM foi otimizado. Sob condi??es otimizadas, 1,0 mmol.L-1 da solu??o etan?lica de 11-MUA e 24 horas foram suficientes para a forma??o de uma SAM est?vel sobre a superf?cie de ouro. Para obten??o de informa??es complementares da SAM, foram realizados c?lculos da Cobertura de Superf?cie, Constante Diel?trica e Espessura do tiol adsorvido no substrato de ouro. Ap?s esta etapa, a adi??o de ant?genos sol?veis de L. infantum sobre a SAM foi acompanhada por SPR. As t?cnicas de Voltametria C?clica e Espectroscopia de Imped?ncia Eletroqu?mica foram usadas para caracterizar a imobiliza??o do ant?geno. Ap?s constru??o do imunosensor, foram adicionados em sua superf?cie soros caninos positivos para Leishmaniose Visceral, evidenciando varia??o significativa no ?ngulo de SPR, mostrando excelente sensibilidade da t?cnica para detec??o da intera??o ant?geno-anticorpo. Por outro lado, a adi??o dos soros negativos n?o foi acompanhada com resposta significativa, concluindo-se tamb?m que o imunosensor apresentou boa especificidade contra anticorpos anti-L. infatum. Portanto, neste trabalho foi desenvolvido com sucesso um sensor empregando SPR para detec??o em tempo real de anticorpos anti-L. infatum, apresentando grande perspectiva como sistema de sensoriamento da Leishmaniose Visceral em ?reas end?micas.