Avaliação de três métodos de extração de DNA de Salmonella sp. em ovos de galinhas contaminados artificialmente

• Autor(a) principal: Ferreira, Ana Cristina dos Reis
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: http://locus.ufv.br/handle/123456789/5057
• topic: Salmonella sp.; Ovos; Galinha; Salmonella sp.; Eggs; Chicken; CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::MEDICINA VETERINARIA PREVENTIVA

Avaliou-se a eficiência de três protocolos para a extração de DNA genômico de bactérias do gênero Salmonella em ovos de galinhas livres de patógenos específicos SPF. Foram utilizados 75 ovos, divididos em cinco grupos com 15 ovos cada. Três grupos de ovos foram inoculados com culturas de Salmonella sp. Um quarto grupo foi inoculado com cultura de Escherichia coli. O quinto grupo foi o controle negativo, que recebeu solução salina 0,85% estéril. Os ovos ficaram incubados na temperatura em torno de 20 25 ºC durante 24 horas. Após esse intervalo foram colhidas cinco gemas de cada grupo, as quais foram homogeneizadas e centrifugadas por 10 minutos; o sobrenadante resultante foi descartado. Após o descarte, adicionou-se PBS pH 7,2 e centrifugou novamente-se novamente. O sedimento obtido de cada grupo foi utilizado na extração do DNA genômico bacteriano. Os métodos utilizados de extração foram: por partículas de sílica e um kit comercial GenElute Bacterial Genomic DNA kit (Sigma®). O DNA extraído foi mantido em temperatura de 20 ºC até a avaliação por PCR. Os primers utilizados são relacionados com o gene invA e resultaram em uma amplificação de 284 pares de base. Os produtos de amplificação foram visualizados em transluminador com luz ultravioleta. Os resultados demonstraram que o método de extração por partículas de sílica foi o mais eficiente, por obter um DNA de boa qualidade e quantidade suficiente para conseguir bons resultados na técnica de PCR.