Obtenção de construções para expressão heteróloga do hormônio gonadotrofina coriônica equina (eCG) e expressão heteróloga do domínio de ligação ao receptor (RBD) da proteína spike de Sars-CoV-2 em sistema procarioto

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Andrade, Lethicia Kelly Ramos
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
Texto Completo: https://locus.ufv.br//handle/123456789/30445
Resumo: A expressão heteróloga de proteínas é uma metodologia amplamente utilizada em diversas áreas como saúde humana e animal, agricultura e pecuária. Desde o desenvolvimento de técnicas de biologia molecular combinadas às técnicas de expressão e purificação de proteínas expressas por microoganismos, os mesmos vêm sendo utilizados como uma boa para a obtenção dessas proteínas, seja para comercialização, utilização em diagnósticos, produção de proteínas e imunoterapia. Para tal, diversos organismos podem ser utilizados para produção dessas macromoléculas. O primeiro e mais comum a ser utilizado é o procarioto Escherichea coli, usado principalmente pela sua fácil manipulação, grande rendimento e baixo custo. Devido a característica intrínseca a procariontes de poucos padrões de glicosilação, a expressão de proteínas nesse organismo é indicada para aqueles que visam a produção de anticorpos e também para uso em kits diagnósticos indiretos – como detecção de anticorpos. Esse trabalho é composto por dois capítulos: no primeiro capítulo, desenvolveu - se a construção de um cassete de expressão para expressão do hormônio gonadotrofina coriônica equina (eCG) em sistema procarioto. Nele, foi possível clonar o cassete em vetores de propagação e de expressão. Já no segundo capítulo, realizou – se a expressão procariótica da porção RBD da proteína Spike de SARS-CoV-2. Resultados preliminares indicam que a proteína expressa possui potencial comercial e poderá compor kits diagnósticos totalmente brasileiros. Palavras-chave: Gonadotrofina Coriônica. Expressão Gênica. Glicoproteína de espícula de coronavírus. Proteína S. Covid19 (Doença).
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spelling Andrade, Lethicia Kelly Ramoshttp://lattes.cnpq.br/0705575009813138Fietto, Juliana Lopes Rangel2023-02-23T11:46:55Z2023-02-23T11:46:55Z2021-01-27ANDRADE, Lethicia Kelly Ramos. Obtenção de construções para expressão heteróloga do hormônio gonadotrofina coriônica equina (eCG) e expressão heteróloga do domínio de ligação ao receptor (RBD) da proteína spike de Sars-CoV-2 em sistema procarioto. 2021. 124 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica Aplicada) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa. 2021.https://locus.ufv.br//handle/123456789/30445A expressão heteróloga de proteínas é uma metodologia amplamente utilizada em diversas áreas como saúde humana e animal, agricultura e pecuária. Desde o desenvolvimento de técnicas de biologia molecular combinadas às técnicas de expressão e purificação de proteínas expressas por microoganismos, os mesmos vêm sendo utilizados como uma boa para a obtenção dessas proteínas, seja para comercialização, utilização em diagnósticos, produção de proteínas e imunoterapia. Para tal, diversos organismos podem ser utilizados para produção dessas macromoléculas. O primeiro e mais comum a ser utilizado é o procarioto Escherichea coli, usado principalmente pela sua fácil manipulação, grande rendimento e baixo custo. Devido a característica intrínseca a procariontes de poucos padrões de glicosilação, a expressão de proteínas nesse organismo é indicada para aqueles que visam a produção de anticorpos e também para uso em kits diagnósticos indiretos – como detecção de anticorpos. Esse trabalho é composto por dois capítulos: no primeiro capítulo, desenvolveu - se a construção de um cassete de expressão para expressão do hormônio gonadotrofina coriônica equina (eCG) em sistema procarioto. Nele, foi possível clonar o cassete em vetores de propagação e de expressão. Já no segundo capítulo, realizou – se a expressão procariótica da porção RBD da proteína Spike de SARS-CoV-2. Resultados preliminares indicam que a proteína expressa possui potencial comercial e poderá compor kits diagnósticos totalmente brasileiros. Palavras-chave: Gonadotrofina Coriônica. Expressão Gênica. Glicoproteína de espícula de coronavírus. Proteína S. Covid19 (Doença).The heterologous expression of protein is a methodology widely used in several areas such as human and animal health, agriculture and livestock. Since the development of molecular biology, techniques combined with techniques for expression and purification of proteins expressed by microorganisms have been used as a good way to obtain these proteins. Either for commercialization, use in diagnostics, protein production and immunotherapy. To this end, several organisms can be used for the production of these macromolecules. The first and most common to be used is the prokaryote Escherichea coli, used mainly for it’s easy manipulation, high yield and low cost. Due to the intrinsic characteristic of prokaryotes with few glycosylation patterns, the expression of proteins in this organism is suitable for those aiming at antibody production and also for use in indirect diagnostic kits - such as antibody detection. This work is composed of two chapters: in the first chapter, the construction of an expression cassette for the expression of the equine chorionic gonadotropin (eCG) hormone in a prokaryotic system was developed. In it, it was possible to clone the cassette in propagation and expression vectors. In the second chapter, the prokaryotic expression of the RBD portion of the Spike protein of SARS-CoV-2 was performed. Preliminary results indicate that the expressed protein has commercial potential and may be used in fully Brazilian diagnostic kits. Keywords: Chorionic gonadotropin. Gene expression. Coronavirus spike glicoprotein. S protein. Covid19 (Disease).Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorporUniversidade Federal de ViçosaBioquímica AplicadaGonadotrofina coriônicaExpressão gênicaGlicoproteína de espícula de coronavírusProteína SCovid19 (Doença)Biologia MolecularObtenção de construções para expressão heteróloga do hormônio gonadotrofina coriônica equina (eCG) e expressão heteróloga do domínio de ligação ao receptor (RBD) da proteína spike de Sars-CoV-2 em sistema procariotoObtaining constructs for heterologous expression of the equine chorionic gonadotrophin (eCG) hormone and heterologous expression of the receptor binding domain (RBD) of the Sars-CoV-2 spike protein in a prokaryotic systeminfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisUniversidade Federal de ViçosaDepartamento de Bioquímica e Biologia MolecularMestre em Bioquímica AplicadaViçosa - MG2021-01-27Mestradoinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:LOCUS Repositório Institucional da UFVinstname:Universidade Federal de Viçosa (UFV)instacron:UFVORIGINALtexto completo.pdftexto completo.pdftexto completoapplication/pdf2627688https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/30445/1/texto%20completo.pdfd3a495ccf6fe4a3afda545c348899764MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/30445/2/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD52123456789/304452023-02-23 08:46:57.747oai:locus.ufv.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.locus.ufv.br/oai/requestfabiojreis@ufv.bropendoar:21452023-02-23T11:46:57LOCUS Repositório Institucional da UFV - Universidade Federal de Viçosa (UFV)false
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