Utilização da PCR em tempo real na detecção e quantificação de PCV2 em diferentes órgãos de suínos clinicamente sadios e apresentando PMWS

• Autor(a) principal: Silva, Fernanda Miquelitto Figueira da
• Data de Publicação: 2008
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: http://locus.ufv.br/handle/123456789/2398
• topic: PCR em tempo real; Circovírus suíno 2; PMWS; Real time PCR; Swine circovirus 2; PMWS; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA

O Porcine circovirus 2 (PCV2) é um vírus não envelopado com genoma de DNA circular fita simples de aproximadamente 1,76 Kb. O PCV2 é o principal agente etiológico das doenças associadas ao PCV2 (PCVAD), sendo o responsável por grandes perdas econômicas na indústria de suínos. Os objetivos deste trabalho consistiram da utilização de metodologias moleculares para a determinação dos órgãos mais adequados para a quantificação da carga viral do PCV2 e a comparação dos genótipos e carga viral em órgãos com diferentes estágios de lesões teciduais. O DNA foi extraído com o kit Wizard SV Genomic Purification System (Promega). As reações de nested PCR foram realizadas utilizando dois pares de oligonucleotídeos e analisadas em gel de agarose. A PCR em tempo real foi realizada utilizando o método TaqMan. As amostras de tecidos foram fixadas em formol 10%, incluídas em blocos de parafina e processadas para a investigação histopatológica. A comparação da sensibilidade do método da PCR em tempo real com a nested PCR mostrou 91% de amostras positivas pelo método da PCR em tempo real, enquanto a nested PCR foi capaz de detectar apenas 66,5% de amostras positivas. Estes resultados mostram que a PCR em tempo real é mais eficaz para detectar o PCV2 em amostras de tecidos do que a nested PCR. Para as amostras de suínos analisadas, os linfonodos foram os que apresentaram a carga viral média significativamente superior aos demais tipos de órgãos (P<0,01) sendo, portanto, o órgão recomendado para ser utilizado em estudos de diagnóstico e patogenia do PCV2. As comparações entre a carga viral e os quatro graus de lesões não mostraram nenhum resultado significativo, assim acredita-se que os diferentes graus de lesões linfóides podem estar associados a outros co-fatores infecciosos ou não infecciosos.