Identificação dos ligantes da lectina BOL e seu envolvimento na sinalização celular

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Almeida, Palloma Porto
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
Texto Completo: https://locus.ufv.br//handle/123456789/27938
Resumo: A BOL é uma proteína do tipo TRAF com atividade de lectina, extraída de Brassica oleracea ssp. botrytis. Trabalhos anteriores identificaram a capacidade da BOL de induzir fagocitose, produção de espécies reativas de oxigênio em macrófagos. O objetivo deste estudo foi analisar a capacidade de ligação da BOL à superfície de leucócitos e a identificação dos seus possíveis ligantes. Demonstramos pela primeira vez que a BOL é capaz de ligar a superfície de linfócitos e macrófagos; capacidade esta que pode estar relacionada aos efeitos observados em macrófagos. Ainda, através do ensaio de MTT foi possível observar que a BOL é capaz de induzir proliferação em esplenócitos, sendo a concentração mínima de 1,25 µg/mL suficiente para indução. Através da cromatografia de afinidade por lectina, com uma resina acoplada com BOL, foi possível purificar 4 possíveis ligantes dessa lectina. O sequenciamento proteico por MALDI/TOF revelou quatro potenciais ligantes, TF3C2, NEST, ELNF1 e FERL3. Análises in silico predisseram os possíveis sítios de glicosilação dessas proteínas e acessibilidade de resíduos na superfície proteica, indicando que as proteínas possuem sítios de glicosilação acessíveis na sua superfície, confirmando a possibilidade desses possíveis ligantes serem glicoproteínas. Essas proteínas estão envolvidas em diferentes níveis com a sinalização celular, proliferação e citoesqueleto, desse modo, a interação da lectina BOL, contendo uma estrutura com apenas dois domínios MATH, pode indicar a possível atuação desse domínio como um CRD e o de lectinas em eventos de sinalização celular. Palavras-chave: Lectina. Domínios proteicos. Sinalização. Imunologia.
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spelling Almeida, Palloma Portohttp://lattes.cnpq.br/7725181602733235Oliveira, Leandro Licursi de2021-06-24T21:27:55Z2021-06-24T21:27:55Z2020-02-14ALMEIDA, Palloma Porto. Identificação dos ligantes da lectina BOL e seu envolvimento na sinalização celular. 2020. 56 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Estrutural) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa. 2020.https://locus.ufv.br//handle/123456789/27938A BOL é uma proteína do tipo TRAF com atividade de lectina, extraída de Brassica oleracea ssp. botrytis. Trabalhos anteriores identificaram a capacidade da BOL de induzir fagocitose, produção de espécies reativas de oxigênio em macrófagos. O objetivo deste estudo foi analisar a capacidade de ligação da BOL à superfície de leucócitos e a identificação dos seus possíveis ligantes. Demonstramos pela primeira vez que a BOL é capaz de ligar a superfície de linfócitos e macrófagos; capacidade esta que pode estar relacionada aos efeitos observados em macrófagos. Ainda, através do ensaio de MTT foi possível observar que a BOL é capaz de induzir proliferação em esplenócitos, sendo a concentração mínima de 1,25 µg/mL suficiente para indução. Através da cromatografia de afinidade por lectina, com uma resina acoplada com BOL, foi possível purificar 4 possíveis ligantes dessa lectina. O sequenciamento proteico por MALDI/TOF revelou quatro potenciais ligantes, TF3C2, NEST, ELNF1 e FERL3. Análises in silico predisseram os possíveis sítios de glicosilação dessas proteínas e acessibilidade de resíduos na superfície proteica, indicando que as proteínas possuem sítios de glicosilação acessíveis na sua superfície, confirmando a possibilidade desses possíveis ligantes serem glicoproteínas. Essas proteínas estão envolvidas em diferentes níveis com a sinalização celular, proliferação e citoesqueleto, desse modo, a interação da lectina BOL, contendo uma estrutura com apenas dois domínios MATH, pode indicar a possível atuação desse domínio como um CRD e o de lectinas em eventos de sinalização celular. Palavras-chave: Lectina. Domínios proteicos. Sinalização. Imunologia.BOL is a TRAF-protein with lectinic activity extracted from Brassica oleracea ssp. Botrytis. Previous work has identified BOL's ability to induce phagocytosis, production of reactive oxygen species in macrophages. The aim of this study was to analyze the capacity of BOL to bind to the leukocyte surface and to identify its possible ligands. We demonstrated for the first time that BOL is capable of binding the surface of lymphocytes and macrophages; capacity which may be related to the effects observed in macrophages. Through the MTT assay it was possible to observe that BOL is capable of inducing proliferation in splenocytes, with a minimum concentration of 1.25 µg/mL sufficient for induction. Through lectin affinity chromatography, with a BOL- coupled resin, it was possible to purify 4 possible ligands of this lectin. Protein sequencing by MALDI/TOF revealed four potential ligands, TF3C2, NEST, ELNF1, and FERL3. In silico analyzes predicted the possible glycosylation sites of these proteins and accessibility of residues on the protein surface, indicating that the proteins have accessible glycosylation sites on their surface, confirming the possibility of these possible ligands being glycoproteins. These proteins are involved at different levels with cell signaling, proliferation and cytoskeleton organization, so the interaction of lectin BOL, containing a structure with only two MATH domains, may indicate the possible role of this domain as a CRD and the role of lectins in cell signaling events. Keywords: Lectin. Protein domains. Signaling. LymphocytesporUniversidade Federal de ViçosaLectinasDomínios proteicosTransdução de sinal celularImunologiaImunoquímicaIdentificação dos ligantes da lectina BOL e seu envolvimento na sinalização celularIdentification of BOL lectin ligands and its role in cell signalinginfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisUniversidade Federal de ViçosaDepartamento de Biologia GeralMestre em Biologia Celular e EstruturalViçosa - MG2020-02-14Mestradoinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:LOCUS Repositório Institucional da UFVinstname:Universidade Federal de Viçosa (UFV)instacron:UFVORIGINALtexto completo.pdftexto completo.pdftexto completoapplication/pdf867485https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/27938/1/texto%20completo.pdfeaf6d97ebe37bc7f0f47276733b5d6ffMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/27938/2/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD52123456789/279382021-06-24 18:28:50.785oai:locus.ufv.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.locus.ufv.br/oai/requestfabiojreis@ufv.bropendoar:21452021-06-24T21:28:50LOCUS Repositório Institucional da UFV - Universidade Federal de Viçosa (UFV)false
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