Padronização de ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para sorologia, detecção e quantificação do circovírus suíno 2

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Fausto, Mariana Costa
Data de Publicação: 2010
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
Texto Completo: http://locus.ufv.br/handle/123456789/5028
Resumo: Porcine circovirus 2 (PCV-2) is the major causative agent of postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) and is associated with different syndromes that affect the swine. The term PCVAD (Porcine circovirus associated diseases) was introduced in 2006 to gather many diseases. Since serological studies are essential for monitoring the virus, the aim of this study was to develop enzyme immunoassays (ELISA) for detection and titration of antibodies to PCV-2 and also for viral quantification as well as the recombinant protein capsid PCV-2 (rCAP PCV-2) in extracts of Escherichia coli. After the standardization of the technique, 29 negative serum samples in ELISA were used for determining the cutt off. The quantitative ELISA was compared with the Immunoperoxidase monolayer (IPMA), through analysis of 155 serum samples, pre-determined by IPMA, of which 125 samples were positive and 30 negative samples for antibodies to PCV-2, in ELISA. The tests showed a concordance of 98.70% confirming the high sensitivity and specificity of ELISA on the IPMA. In the quantitative assay, 20 serum samples had the title determined by ELISA and it showed a higher detection limit of antibodies than the IPMA in 18 of the 20 samples tested. To quantify the rCAP PCV-2 in extracts of E.coli, a capture ELISA was developed. Were used precipitated IgGs from polyclonal rabbit serum anti-rCap PCV-2 as capture antibody and the conjugated IgGs with peroxidases as detection antibody. A standard curve was obtained by serial dilution of rCap PCV-2 and the test showed a detection limit in the range of 0.625 to 0.0097 mg/mL, which was successfully used to quantify the protein in the extract of E.coli. Thus it is expected that this test is also applied in the quantification of future PCV-2 in field samples.
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Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2010.http://locus.ufv.br/handle/123456789/5028Porcine circovirus 2 (PCV-2) is the major causative agent of postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) and is associated with different syndromes that affect the swine. The term PCVAD (Porcine circovirus associated diseases) was introduced in 2006 to gather many diseases. Since serological studies are essential for monitoring the virus, the aim of this study was to develop enzyme immunoassays (ELISA) for detection and titration of antibodies to PCV-2 and also for viral quantification as well as the recombinant protein capsid PCV-2 (rCAP PCV-2) in extracts of Escherichia coli. After the standardization of the technique, 29 negative serum samples in ELISA were used for determining the cutt off. The quantitative ELISA was compared with the Immunoperoxidase monolayer (IPMA), through analysis of 155 serum samples, pre-determined by IPMA, of which 125 samples were positive and 30 negative samples for antibodies to PCV-2, in ELISA. The tests showed a concordance of 98.70% confirming the high sensitivity and specificity of ELISA on the IPMA. In the quantitative assay, 20 serum samples had the title determined by ELISA and it showed a higher detection limit of antibodies than the IPMA in 18 of the 20 samples tested. To quantify the rCAP PCV-2 in extracts of E.coli, a capture ELISA was developed. Were used precipitated IgGs from polyclonal rabbit serum anti-rCap PCV-2 as capture antibody and the conjugated IgGs with peroxidases as detection antibody. A standard curve was obtained by serial dilution of rCap PCV-2 and the test showed a detection limit in the range of 0.625 to 0.0097 mg/mL, which was successfully used to quantify the protein in the extract of E.coli. Thus it is expected that this test is also applied in the quantification of future PCV-2 in field samples.O Circovírus suíno 2 (PCV-2) é o principal agente causador da Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS), e está associado a diferentes síndromes que acometem esses animais. O termo PCVAD (Porcine circovírus 2 associated diseases) foi introduzido em 2006, para enquadrar todas essas doenças. Uma vez que estudos sorológicos são fundamentais para o monitoramento do vírus, o objetivo desse trabalho foi desenvolver ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para a detecção e titulação de anticorpos anti-PCV-2 e também para a quantificação viral, assim como da proteína recombinante do capsídeo do PCV-2 (rCap PCV-2) em extratos de Escherichia coli . Após a padronização da técnica, 29 amostras de soro negativos por ELISA indireto foram utilizadas para a determinação do cutt off. O ELISA qualitativo foi comparado com a Imunoperoxidase em Monocamada (IPMA), através da análise de 155 amostras de soro, pré-determinadas por IPMA, sendo 125 amostras positivas e 30 amostras negativas para anticorpos anti-PCV-2, no ELISA. Os testes apresentaram uma concordância de 98,70 % confirmando assim a alta sensibilidade e especificidade do ELISA relativa ao IPMA. No ensaio quantitativo, 20 amostras de soro tiveram o título determinado através do ELISA e este apresentou um maior limite de detecção de anticorpos do que o IPMA, em 18 das 20 amostras avaliadas. Para a quantificação da rCap PCV-2 presente em extratos de E.coli, um ELISA de captura foi desenvolvido. Foram utilizadas IgGs precipitadas a partir de soro policlonal de coelho anti-rCap PCV-2 como anticorpo de captura e as IgGs conjugadas com peroxidase como anticorpo de detecção. Uma curva-padrão foi obtida através da diluição seriada da rCap PCV-2 e o ensaio apresentou um limite de detecção na faixa entre 0,625 a 0,0097 μg/mL, que foi utilizado com sucesso para quantificar a proteína no extrato de E.coli. Assim espera-se que este teste seja também aplicado futuramente na quantificação do PCV-2 em amostras de campo.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológicoapplication/pdfporUniversidade Federal de ViçosaMestrado em Medicina VeterináriaUFVBRBiotecnologia, diagnóstico e controle de doenças; Epidemiologia e controle de qualidade de prod. deCircovírus suíno 2ELISACurva-padrãoPorcine circovirus type 2Standard curveCNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::MEDICINA VETERINARIA PREVENTIVAPadronização de ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para sorologia, detecção e quantificação do circovírus suíno 2Standardization of enzyme immunoassay (ELISA) for serology, detection and quantification of porcine circovirus type 2info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/embargoedAccessreponame:LOCUS Repositório Institucional da UFVinstname:Universidade Federal de Viçosa (UFV)instacron:UFVORIGINALtexto completo.pdfapplication/pdf1965376https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/5028/1/texto%20completo.pdf32df14418e8fde9c7b4067ac9f8ea6c6MD51TEXTtexto completo.pdf.txttexto completo.pdf.txtExtracted texttext/plain144335https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/5028/2/texto%20completo.pdf.txt62e0424b439eb7ed76dc1c5142f74aa3MD52THUMBNAILtexto completo.pdf.jpgtexto completo.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg3540https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/5028/3/texto%20completo.pdf.jpg392c78d4aa3deb76266704b350129bbdMD53123456789/50282016-06-16 13:28:36.161oai:locus.ufv.br:123456789/5028Repositório InstitucionalPUBhttps://www.locus.ufv.br/oai/requestfabiojreis@ufv.bropendoar:21452016-06-16T16:28:36LOCUS Repositório Institucional da UFV - Universidade Federal de Viçosa (UFV)false
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