Restriction enzyme improves the efficiency of genetic transformations in Moniliophthora perniciosa, the causal agent of witches’ broom disease in Theobroma cacao

• Autor(a) principal: Lopes, Francis Julio Fagundes
• Data de Publicação: 2008
• Outros Autores: Queiroz, Marisa Vieira de, Lima, Juliana Oliveira, Silva, Viviane Aline Oliveira, Araújo, Elza Fernandes de
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: eng
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: http://dx.doi.org/10.1590/S1516-89132008000100004; http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/25613
• topic: Moniliophthora perniciosa; Transformation; Restriction enzyme

A presença de enzima de restrição na mistura de transformação aumentou a eficiência da transformação em Moniliophthora perniciosa. A influência da forma do vetor (linear ou circular), o padrão de integração do plasmídeo nos sítios genômicos e a influência do promotor usado para expressar o gene marcador foram também analisados. A adição de BamHI ou NotI aumentou o número de transformantes 3-10 vezes e 3 vezes, respectivamente, em relação ao controle sem a adição da enzima. O uso de plasmídeos pré-linearizados não aumentou a eficiência da transformação quando comparado à eficiência obtida com plasmídeos circulares. No entanto, a freqüência de transformantes multi-cópias aumentou significativamente. Juntos os procedimentos reportados aqui resultaram em processos mais eficientes de produção de protoplastos e transformação, onde o tempo necessário para o aparecimento dos transformantes e o número de inserções múltiplas foi reduzido.