DNA sizing, composition and origin of induced micronuclei of Zea mays L.

• Autor(a) principal: Tostes, Nathália Vállery
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: https://locus.ufv.br//handle/123456789/28757
• topic: Milho - Melhoramento genético; Mutagênese; Sequenciamento de nucleotídeo; Micromanipulação; DNA; Mutagênese

Os micronúcleos (MN) são constituídos por cromatina, que se originam de danos ao DNA induzidos por agentes mutagênicos. Os agentes mutagênicos promovem um efeito clastogênico caracterizado por danos à estrutura cromossômica e/ou um efeito aneugênico com a perda de um cromossomo inteiro. Devido à sua origem, os MN são distintos em relação à origem genômica e composição. Na mutagênese vegetal, sequências centroméricas, teloméricas e de rDNA foram identificadas na composição de MN. Nosso objetivo foi investigar o tamanho do DNA, composição e origem de MN induzidos de Zea mays após o tratamento com metanossulfonato de metila (MMS). Usando citometria de imagem, mostramos que os MN possuem tamanhos de DNA distintos, predominantemente entre 0,5 - 1,5 pg. Esses valores indicaram que os MN foram gerados a partir de fragmentos cromossômicos diferentes. A variabilidade da composição dos MN foi confirmada pela variação do sinal de fluorescência das sequências knob 180-bp e do retrotransposon-LTR Grande. Portanto, essas sequências, principalmente a sequência retrotransposon- LTR Grande rica em guanina, podem ser consideradas hotspots de danos por MMS e, consequentemente, de formação de MN. As diferentes origens dos MN também foram reveladas por um pool de sondas produzido a partir de dois MN individuais micromanipulados. Cada MN micromanipulado foi originado de diferentes fragmentos de cromossomos que consistem em sequências de DNA de todos os cromossomos de Z. mays. No geral, nossos resultados mostraram a variabilidade de MN de Z. mays a partir de vários fragmentos de cromossomos formados após o tratamento com MMS. Portanto, nossos resultados demonstraram a extensão do dano genotóxico promovido por MMS no genoma de Z. mays. Fornecemos insights sobre a estrutura dos MN e metodologias que podem ser empregadas na pesquisa de mutagênese vegetal. Palavras-chave: Mutagênese. Milho. Conteúdo de DNA. Micromanipulação. Sequências repetitivas de DNA.