Caracterização funcional das proteínas Dicer-like em Colletotrichum lindemuthianum

• Autor(a) principal: Magalhães, Raíssa Ferreira
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: https://locus.ufv.br//handle/123456789/31456; https://doi.org/10.47328/ufvbbt.2023.056
• topic: Colletotrichum lindemuthianum - Genética; Ácido ribonucléico - Síntese; Fungos fitopatogênicos; Feijão - Doenças e pragas; Antracnose; Microbiologia Agrícola

A importância social, agrícola e econômica do feijoeiro-comum demanda a sustentabilidade de alta produtividade da cultura. A antracnose do feijoeiro-comum, causada pelo fungo Colletotrichum lindemuthianum é responsável por perdas expressivas na produção de feijão. Esse fungo é conhecido por possuir alta variabilidade genética, refletida no grande número de raças fisiológicas, o que dificulta a manutenção de cultivares resistentes a longo prazo. Fungos fitopatogênicos secretam moléculas efetoras para inativar ou escapar aos mecanismos de defesa da planta hospedeira e pequenos RNAs (sRNAs) podem atuar como efetores. A síntese da maior parte desses sRNAs descritos em fungos exige a participação de proteínas Dicer-like (DCLs), que fazem parte do mecanismo de RNA de interferência (RNAi). Colletotrichum lindemuthianum possui um sistema de silenciamento gênico mediado por RNAi e foi observada a presença de dois genes (dcl1 e dcl2) que codificam proteínas Dicer-like (DCL1 e DCL2). Para avaliar o papel dessas proteínas no desenvolvimento e na patogenicidade de C. lindemuthianum, os genes dcl1 e dcl2 foram deletados utilizando a técnica Split Marker, sendo os mutantes simples analisados e comparados ao isolado tipo selvagem quanto ao crescimento vegetativo, conidiação, formação de tubos de anastomose de conídios (CATs), formação de tubos germinativos (TG) e patogenicidade. Foram obtidos 39 transformantes para dcl1 e 52 transformantes para dcl2, os quais foram analisados por Southern blot. Nos mutantes simples selecionados com perda de função de dcl1 (Δdcl1) ou de dcl2 (Δdcl2), não foram observadas alterações significativas no crescimento, na produção e germinação de conídios ou na agressividade de C. lindemuthianum. Por outro lado, foi observada diminuição na formação de CATs, tanto em Δdcl1 quanto em Δdcl2. Com a obtenção do mutante duplo Δdcl1Δdcl2, foram feitos testes preliminares que demonstram redução dos sintomas da antracnose nas folhas de feijoeiro-comum, bem como na formação de conídios. Assim, sugere-se que esses genes possuam redundância funcional e que pequenos RNAs que tiveram sua formação diminuída devido à falta das proteínas DCLs, que são capazes de processá-los, podem atuar como moléculas efetoras em C. lindemuthianum, contribuindo para a sua patogenicidade. Palavras-chave: Colletotrichum lindemuthianum. Dicer-like. sRNAs. RNAi.