Parâmetros reprodutivos em touros: análise proteômica do plasma seminal e teste de congelabilidade do sêmen

• Autor(a) principal: Okano, Denise Silva
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: https://locus.ufv.br//handle/123456789/28556
• topic: Andrologia; Cruzamento; Sêmen; Reprodução Animal

Na espécie bovina existem animais que acumulam espermatozoides senescentes na cauda do epidídimo, devido a abstinência sexual, esses animais caracterizam-se por ejacularem grande volume de sêmen com baixa motilidade espermática e que com coletas consecutivas tem o aumento gradual dessa característica. Essa condição se apresenta principalmente em touros criados sob manejo extensivo, e o uso desses animais pode diminuir a eficiência reprodutiva durante a estação de monta (BARTH 2007). O plasma seminal é uma mistura bioquimicamente complexa e que tem importância significativa na regulação da função espermática. Diante disso, o objetivo desse estudo foi identificar o perfil proteômico em ejaculados de touros aprovados e em repouso sexual imediatamente após a avaliação do primeiro ejaculado. Foram utilizados seis touros em repouso sexual, e dois animais como controle. Três grupos foram formados, sendo o grupo A constituído por amostras do sêmen da primeira coleta dos touros em repouso sexual; grupo B: amostra de sêmen da última coleta dos touros em repouso sexual; e grupo C: amostra de sêmen dos touros controle. Todos os touros foram submetidos à avaliação andrológica pelo método de eletroejaculação e foram avaliados os aspectos físicos e morfológicos dos ejaculado por meio de microscopia óptica convencional e de contraste de fase. Depois das análises, os ejaculados foram centrifugados e os sobrenadantes (plasma seminal) foram usados para estudo proteômico. Depois da centrifugação, as proteínas do plasma seminal foram quantificadas pelo método de Bradford e analisadas por meio de eletroforese monodimensional e espectrometria de massas (LC-MS/MS). As proteínas foram identificadas pelo MASCOT e validadas estatisticamente usando o software SCAFFOLD Q+. As proteínas foram caracterizadas de acordo a suas classes e processos biológicos pelo STRAP usando os termos de ontologia gênica depositados no banco de dados UniprotKB. As proteínas diferencialmente abundantes foram quantificadas pelo método emPAI considerando unicamente aquelas proteínas com foldchange superior a 1,5 vezes. Os dados referentes à motilidade espermática foram submetidos à transformação angular (Y^'=arcsen√Y). As variáveis quantitativas foram analisadas por ANOVA. As variáveis qualitativas foram analisadas pelo teste de Kruskal-Wallis. O nível de significância adotado foi α = 5%. Foram encontratros 1,67% de touros em repouso sexual (7/419). Houve diferença (p<0,05) em relação à motilidade, vigor e turbilhonamento espermático entre os grupos, porém não houve diferença das características morfológicas. Na análise proteômica foram identificadas 93 proteínas no plasma seminal. A maioria delas envolvidas no processo celular (36,22%), regulação biológica (35,20%) e interação celular (19,12%). Das proteínas identificadas 6 foram diferencialmente expressas entre o grupo A e B (ALBU, NPC2, Z13, SPAD1, CCL2, F1N1Z8), e 4 (Q4R0H2, SPAD1, NPC2 e Z13) foram diferencialmente expressas entre B e C. Em relação às funções moleculares das proteínas, as principais funções foram de ligação (49,50 %) e atividade catalítica (35,34%). Palavra-chave: Andrologia. Cruzamento. Sêmen