Expressão e purificação da proteína recombinante NTPDase2 de Leishmania infantum e sua aplicação no imunodiagnóstico da leishmaniose canina

• Autor(a) principal: Souza, Ronny Francisco de
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: http://locus.ufv.br/handle/123456789/327
• topic: Proteína recombinante; Leishmaniose canina; Imunodiagnóstico; Recombinant protein; Canine leishmaniasis; Immunodiagnostic; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR

No Brasil as leishmanioses são doenças de caracter zoonótico, sendo transmitida por flebótomos hematófagos da família Psychodidae. O desenvolvimento das formas clinicas: tegumentares ou visceral, está intimamente ligado à espécie envolvida na infecção e ao estado imunológico do indivíduo infectado. O cão é atualmente o principal reservatório de importância epidemiológica. A eliminação de cães infectados é hoje uma das ações de vigilância epidemiológica, sendo orientada por sorodiagnóstico. Nesse estudo a NTPDase2 de L. infantum foi expressa de forma heteróloga em E. coli, e purificada. A proteína rNTPDase2 purificada foi utilizada em ensaio de ELISA indireto em dois bancos de soros. Um banco montado com amostras do município de Caratinga, uma região endêmica para Leishmaniose Visceral Canina (LVC) e o outro banco com amostras do município de Governador Valadares, uma região endêmica para Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). Também foram incluídas neste estudo 30 amostras de soro de cães de região não endêmica para LVC infectados experimentalmente com T. cruzi. Para as amostras de Caratinga a rNTPDase2 purificada foi utilizada na concentração de 0,5 μg. A sensibilidade foi 100% (IC 95%: 92,60% a 100,0%), a especificidade 100% (IC 95%: 86,77% a 100,0%) e o índice de concordância foi excelente (k= 1). Para as amostras de Governador Valadares o antígeno foi utilizado em três concentrações: 0,5, 1 e 2 μg. Para essas concentrações a sensibilidade variou de 91,67 a 95,35% e a especificidade foi de 100%, o índice de concordância foi excelente (k> 0,8). Amostras de tecidos de 48 cães do município de Governador Valadares foram também utilizadas para ensaio parasitológico direto. Na técnica de imprint foi utilizado tecido de baço e fígado corados com panótico rápido (sensibilidade= 79,16%). Utilizando linfonodo em cortes de 0,5 μM e corados com Giemsa Lento, H&E, a sensibilidade foi de 100% para ambas as técnicas. Na técnica de imunohistoquímica, utilizando soro hiperimune de coelho anti-rNTPDase2, a sensibilidade foi 89,58%. A rNTPDase2 também foi usada em ensaio imunocromatográfico piloto mostrando o potencial para o uso neste tipo de teste. Neste estudo é demonstrado que a rNTPDase2 pode ser utilizada como um novo e potencial antígeno no diagnóstico da LVC.