Expressão heteróloga de proteínas do vírus dengue em Komagataella phaffii para padronização de kits de diagnósticos

• Autor(a) principal: Mello, Iago Oliveira de
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: https://locus.ufv.br//handle/123456789/31441; https://doi.org/10.47328/ufvbbt.2023.185
• topic: Dengue - Diagnóstico; Antígenos; Vírus da dengue; Proteínas do envelope viral; Expressão gênica; Microbiologia Agrícola

O diagnóstico preciso, confiável e diferencial na fase inicial da infecção pelo Vírus da Dengue (DENV) é fundamental diante do risco de agravamentos da doença. Os sintomas de cada paciente podem variar muito, indo desde uma doença autolimitada chamada Febre da Dengue (FD) ou Dengue Clássica (DC), até às formas mais severas, como a Febre da Dengue Hemorrágica (FDH) e a Síndrome de Choque da Dengue (SCD), variando dentro de um espectro contínuo onde muitos pacientes apresentam sintomas leves acabam não recebendo tratamento adequado e, muitas vezes, não recebem o diagnóstico de infecção. Com o objetivo de padronizar e formular um diagnóstico preciso e confiável, através da expressão de proteína em K.Phaffi para obtenção do domínio III da proteína estrutural E dos DENV-1 e DENV-4, em larga escala, capaz de identificar a fase inicial da infecção pelo vírus, sendo fundamental diante do risco de agravamentos da doença, com potencial risco de morte. Utilizamos um sistema de expressão heteróloga de proteínas, para expressão do domínio III da proteína estrutural E do DENV-2 e -4. Onde atualmente, os principais centros de pesquisa e diagnóstico do mundo têm apresentado dificuldades na obtenção de preparações com conteúdo adequado de antígeno, necessitando concentrar o antígeno através de centrifugação zonal contínua de sobrenadantes de culturas infectadas, uma vez que a produção do DENV em culturas celulares é relativamente baixa. Este quadro ratifica a existência do obstáculo importante, à produção de antígenos, a serem empregados em ensaios usados na captura do anticorpo presente no soro do paciente infectado. Nesse sentido, concluímos que o sistema heterólogos de expressão de proteínas mostrou-se promissores devido ao alto rendimento, integridade antigênica e custo reduzido para produção em escala e abrir caminhos para produção de testes diagnósticos menos onerosos. Palavras-chave: Antígenos. Domínio III. Estrutural. Envelope.